血清脂蛋白的快速離心分離法

來源：上海天放實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 2011年06月30日 16:32

血清脂蛋白的快速離心分離法

YU.2003.7

利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液，在各種型號(hào)的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果。下面舉了幾個(gè)分離實(shí)例，實(shí)際上還可以應(yīng)用于各種型號(hào)各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭。

（一）梯度液

A液：11.40gNacl，0.1g EDTA-Na2，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1

ml 1N NaOH，混勻至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）。終密度1.006g/cm³，PH10.37。

B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH9.72。

C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH8.86。

（二）離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭

• 離心機(jī)：Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。

Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī)。

• 轉(zhuǎn)頭，離心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。

S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g，8×8ml，K=23，6PC厚壁管。

S 70 AT：70,000rpm,505,000×g，8×40ml，K=44，40PA管。

（三）血漿-血球分離：

全血，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min，沉淀為血細(xì)胞，上清血漿待用。

（四）乳糜粒分離：

• 離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用，4×10⁶（g×min），10℃

• 梯度液：離心管下部3/4容積為血漿，上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。

• 離心結(jié)果：乳糜粒上浮，離心管傾斜，吸管貼管壁慢吸出（約占血漿容積的2~6%。禁令12小時(shí)以上供血者血漿中乳糜含量很低，食后供血者含量較高。

（五）血清脂蛋白分離：

（?。￢LDL分離（ρ<1.006g/cm³）

（ⅱ）LDL（含IDL）分離（1.006g/cm³<ρ<1.063g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	*次離心后上部VLDL取出，下部600μl移入另一離心管，加入300μl B液，充分混合	140，000rpm×80min 16℃ 加速：9 減速：7	上部1/3體積LDL+IDL吸出
S80AT₃ （CS-150GXL）	*次離心后上部VLDL吸出，，下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml B液并充分混合	80，000rpm×5.5hrs 16℃ 加速：9減速：7	同上
P70AT （CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型）	*次離心后上部11.7ml吸出，下部約24ml 移入另一離心管，加入11.7ml B液，充分混合	70，000rpm×10hrs 16℃ 加速：9 減速：6	同上

（ⅲ）HDL分離（1.063g/cm³<ρ<1.21g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部300μl后，下部600μl移入另一離心管，加入300μl C液，充分混合	140，000rpm×140min 16℃ 加速：9 減速：7	可見較明顯分層，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白
S80AT₃ （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部約1.7ml、下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml C液，充分混合	80，000rpm×8小時(shí) 16℃ 加速：9 減速：7	同上
P70AT （CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組）	第二次離心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一離心管，加入約12ml C液，充分混合	70，000rpm×15小時(shí) 16℃ 加速：9 減速：6	同上

（本文部分實(shí)驗(yàn)由上海長海醫(yī)院賈鳳玉完成）

參考文獻(xiàn)

（1）余興明：“血清脂蛋白的離心分離技術(shù)”，“生命的化學(xué)”，1997.3

（2） Hitachi KoKi：“himac Application’,No:89,1999.7 03，2000.10

相關(guān)產(chǎn)品

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

聯(lián)系我們