免疫組化步驟

1. 脫蠟：切片放入二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3，各10分鐘，無水乙醇1，無水乙醇2，無水乙醇3各2分鐘，流水沖洗5分鐘。
2. 修復(fù)：高壓鍋內(nèi)加入2000毫升檸檬酸鈉修復(fù)液，加熱至沸騰后將切片放入并加蓋，壓力閥轉(zhuǎn)動后開始計時3分鐘，自然冷卻至室溫。
3. 洗滌：Pbs洗滌3次，每次5分鐘。
4. 阻斷：3%過氧化氫室溫阻斷10分鐘。
5. 洗滌：Pbs洗滌3次，每次5分鐘。
6. 封閉：2.5%山羊血清室溫封閉1小時，甩去封閉液再加入一抗，4度過夜。
7. 洗滌：Pbs洗滌3次，每次5分鐘。
8. 二抗：加入對應(yīng)二抗，室溫孵育30分鐘。
9. 洗滌：Pbs洗滌3次，每次5分鐘。
10. 顯色：dab顯色1-2分鐘，顯微鏡下觀察至有明顯陽性，用去離子水終止反應(yīng)。
11. 復(fù)染：蘇木素復(fù)染2分鐘，再用流水沖洗。
12. 分化：鹽酸乙醇分化1-2秒，再用流水沖洗。
13. 藍化：稀氨水藍化10秒，再用流水沖洗。
14. 脫水：75%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水乙醇1，無水乙醇2梯度脫水，每次5分鐘。
15. 透明：二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3透明，每次5分鐘。
16. 封片：中性樹膠封片后，烘箱中烤干，顯微鏡下觀察。

實驗試劑

1，檸檬酸鈉修復(fù)液     貨號：自配液

2，PBS                貨號：自配液

3，山羊抗兔二抗       貨號：vector mp-7452

4，dab                貨號：中杉金橋 zli-9018

一抗：

α-sma                貨號：ab124964             實驗比例：1:1000