內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒 （微板定量顯色基質(zhì)法）使用說(shuō)明書(shū)

內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒 (微板定量顯色基質(zhì)法)使用說(shuō)明書(shū)
【檢測(cè)限】
【用途】
【原理】
【貯存】2~8℃，避光貯存。
【用法】
【試劑盒組成】
表1 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
表2 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
0.1 0.25 0.5 1 內(nèi)毒素濃度（EU/ml）
0.6 0.5 0 加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml） 1.8
0.2 0.2 0.5 1 加1EU/ml內(nèi)毒素溶液（ml）
0.01 0.025 0.05 0.1 內(nèi)毒素濃度（EU/ml）
0.9 0.6 0.5 0 加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml）
0.1 0.2 0.5 1 加0.1EU/ml內(nèi)毒素溶液（ml）
顯色基質(zhì)鱟試劑（End-point Chromogenic Tachypleus Amebocyte 
Lysate，EC TAL）用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的定量檢測(cè)，禁止以任何途徑進(jìn)
入機(jī)體。 
鱟試劑為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品，鱟試劑
中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下
（溫度，pH值及無(wú)干擾物質(zhì)），細(xì)菌內(nèi)毒素激活C 因子，引起一系列酶
促反應(yīng)，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì)，
使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺（pNA，λ =405nm）。在一定
時(shí)間內(nèi)，pNA的生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)，據(jù)此，可以定量供
試品的內(nèi)毒素濃度。
1 . 材料和設(shè)備
1.1 試劑（試劑盒配套）
鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、顯色基質(zhì)、反應(yīng)終止劑、細(xì)菌內(nèi)毒素
檢查用水。
1.2 器材
試劑盒配套：
無(wú)熱原96孔板（MPC96）、微板架。
鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、顯色基質(zhì)、反應(yīng)終止劑、細(xì)菌內(nèi)毒素
檢查用水
2. 供試品的預(yù)處理及注意事項(xiàng)
2.1 供試品與鱟試劑混合后的溶液的pH值應(yīng)在6.0～8.0之間，若超出此
范圍，需用無(wú)熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調(diào)節(jié)。
2.2 若供試品中可能存在鱟試驗(yàn)的干擾物質(zhì)，處理參見(jiàn)【供試品的干擾
試驗(yàn)】。
2.3 若供試品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖會(huì)產(chǎn)生G因子旁路反
應(yīng)，干擾內(nèi)毒素檢測(cè)），需選用特異性鱟試劑（我司提供）。
3. 實(shí)驗(yàn)操作
3.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
標(biāo)準(zhǔn)曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為0.01，0.025，0.05，0.1EU/ml或
0.1，0.25，0.5，1.0EU/ml。稀釋方法如下：取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品1
瓶，加入1ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，置旋渦混勻器上劇烈振搖15分鐘
（振搖過(guò)程不得濺出?。⑸鲜鰞?nèi)毒素溶液進(jìn)一步用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查
用水稀釋為10EU/ml的內(nèi)毒素溶液，再稀釋為1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液。
以15EU/瓶為例：
（注：橫線上方為加入作為母液的內(nèi)毒素溶液的量，下方為加
入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水的量）
 0.8ml CSE 0.2ml CSE
15EU/瓶 15EU/ml 10EU/ml 1EU/ml
 1ml TRW 0.4ml TRW 1.8ml TRW
以1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液為母液按表1稀釋成0.1，0.25，0.5，1.0 
EU/ml的濃度梯度或以0.1EU/ml的內(nèi)毒素溶液為母液按表2稀釋成0.01，
0.025，0.05，0.1EU/ml的濃度梯度。每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混勻器上
劇烈振搖至少30秒。稀釋的內(nèi)毒素溶液靜置時(shí)間超過(guò)10分鐘，用前需在
旋渦混勻器上劇烈振搖1分鐘，配制好的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)用
完。
1 2
max
EC64405：檢測(cè)區(qū)間為 0.1EU/ml～1.0EU/ml；
EC64405S：檢測(cè)區(qū)間為0.1EU/ml～1.0EU/ml或0.01EU/ml～0.1EU/ml
EC64405SS：檢測(cè)區(qū)間為0.1EU/ml～1.0EU/ml或0.01EU/ml～0.1EU/ml