1、樣品的準(zhǔn)備
(1)細(xì)菌或細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
(2)組織:稱(chēng)取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、加樣表和測(cè)定步驟:
試劑名稱(chēng)(μL) 對(duì)照管 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準(zhǔn)確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測(cè)定吸光值 A,樣品管計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標(biāo)準(zhǔn)管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標(biāo),吸光度 A(x)為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
相關(guān)產(chǎn)品
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