對于經(jīng)常進行抗體檢測工作的人來說,非特異性結(jié)合和背景著色常常是一大困擾,某些情況下二抗存在交叉反應是主要原因。
二抗,即第二抗體,是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。二抗的制備一般是利用抗體是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì),去免疫異種動物,由異種動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對于此抗體的免疫球蛋白。因此二抗實際上也是多抗,本身的特性決定了其大概率會存在交叉反應。
針對這一問題,我們可以在制備二抗時添加一步預吸附的純化步驟,以提高抗體的特異性?;驹硎菍⒍沽鹘?jīng)固定有潛在交叉反應的物種的血清蛋白的基質(zhì)柱,有非特異性結(jié)合的二抗會留在柱中,而特異性高的二抗將通過基質(zhì)柱。
經(jīng)過預吸附處理的二抗能有效降低非特異性背景,尤其在多重染色實驗和樣本中內(nèi)源性免疫球蛋白(Igs)含量高的IHC實驗時效果更好。
多重染色實驗時,由于同時使用多個一抗和對應的二抗,每種二抗有和其他一抗之間交叉反應的風險。例如同時使用兔抗和小鼠抗進行雙染實驗時,應使用針對小鼠血清預吸附的抗兔二抗,和針對兔血清預吸附的抗小鼠二抗。
而IHC實驗中如果所用樣本中內(nèi)源性免疫球蛋白(Igs)含量高,二抗也有與樣本本身免疫球蛋白交叉反應的風險。如對人組織樣本進行染色時,應使用對人血清預吸附的HRP二抗。
菲恩生物提供的抗體種類廣泛,涵蓋了腫瘤、神經(jīng)生物學、肝細胞、信號傳道、表觀遺傳學、心血管生物學、免疫學、代謝、細胞生物學等研究領(lǐng)域,還包括單克隆抗體、多克隆抗體、標記的抗體和未標記的抗體。其中多克隆抗體是經(jīng)過抗原親和純化的特異性IgG。菲恩生物提供10,000多種抗體產(chǎn)品,可用于大多數(shù)動物物種。
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