正相色譜和反相色譜究竟有何不同？答案其實(shí)很簡(jiǎn)單

高效液相色譜（HPLC）法選擇性高、靈敏度高、分析速度快，是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。色譜柱作為高效液相分離系統(tǒng)的中的重要環(huán)節(jié)，色譜柱的類型決定了色譜系統(tǒng)的性質(zhì)，色譜柱的粒徑和長(zhǎng)度影響了分析時(shí)間和分析效率。

氨基柱、苯基柱、氰基柱等正相色譜柱和C18、C8等反相色譜柱是色譜分析工作中常見(jiàn)的兩類色譜柱。正相色譜和反相色譜的區(qū)別本質(zhì)上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強(qiáng),洗脫順序由弱到強(qiáng)；反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強(qiáng)到弱。

正相色譜：采用極性鍵合固定相，硅膠表面鍵合的是極性的有機(jī)基團(tuán)，鍵合相的名稱由鍵合上去的基團(tuán)而定。最流動(dòng)相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑，如烴類溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等)，以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。分離機(jī)制屬于分配色譜：組分的分配比K值，隨其極性的增加而增大，但隨流動(dòng)相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大(或濃度增大)而降低。同時(shí)，極性鍵合相的極性越大，組分的保留值越大。該法主要用于分離異構(gòu)體，極性不同的化合物，特別是用來(lái)分離不同類型的化合物。分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

反相色譜：用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。