細(xì)胞培養(yǎng)的常見污染原因

       預(yù)防措施：

       在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，潛在的污染途徑主要包括操作技術(shù)和環(huán)境，其中環(huán)境因素又包括了無菌試劑和材料、超凈工作臺(tái)、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、水浴鍋和冰箱等。

       一、操作技術(shù)

       培養(yǎng)操作前：

       ⑴ 個(gè)人衛(wèi)生：進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室時(shí)應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)室專用鞋或者穿鞋套；穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和手套，用消毒酒精（75%濃度的乙醇）擦拭雙手；如果操作者是長(zhǎng)發(fā)，應(yīng)扎于腦后。

       ⑵ 工作臺(tái)準(zhǔn)備：提前 0.5~1h 打開超凈臺(tái)的紫外燈進(jìn)行消毒；用蘸有消毒酒精的紙巾擦拭超凈臺(tái)的臺(tái)面、擋板等。

       ⑶ 試劑準(zhǔn)備：從冷藏室或冷凍室取出所需的培養(yǎng)基等試劑，于37℃水浴鍋中進(jìn)行加熱；加熱后用消毒酒精擦拭瓶身，并立馬放入超凈工作臺(tái)內(nèi)。

       須注意的事項(xiàng)有：外套、背包等物品，易附著豐富的微生物，不應(yīng)帶入細(xì)胞房。

       培養(yǎng)操作中：

       ⑴ 臺(tái)面布置：按實(shí)驗(yàn)需要和個(gè)人習(xí)慣，合理放置試劑、耗材、儀器等物品；點(diǎn)燃酒精燈后開始實(shí)驗(yàn)操作。

       ⑵ 操作：靠近火焰進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作；試劑瓶經(jīng)火焰旋轉(zhuǎn)灼燒后打開；挑選吸管，快速的縱向在火焰上來回移動(dòng)并做 180°旋轉(zhuǎn)；將試劑瓶向吸管傾斜，吸出所需的液體量；灼燒瓶頸后，重新蓋上蓋子；等所有操作完畢后，擰緊瓶蓋。

       須注意的事項(xiàng)有：操作要準(zhǔn)確、敏捷、有序；吸取溶液時(shí)，應(yīng)專管專用，避免交叉污染；吸管管口要向下傾斜，以防止液體倒流進(jìn)入移液器內(nèi)發(fā)生污染；盡量減少細(xì)胞和培養(yǎng)基的敞口時(shí)間；已開口的試劑瓶盡可能的傾斜放置，防止下落微生物的污染；避免在敞口的細(xì)胞培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿蓋上方操作；不要面對(duì)工作臺(tái)或二氧化碳培養(yǎng)箱講話或咳嗽，防止口腔微生物隨唾沫飛入而發(fā)生污染；若發(fā)生外溢，用蘸有消毒酒精的棉球及時(shí)擦去。

       培養(yǎng)操作后：

       ⑴ 整理：將試劑放回原來的存儲(chǔ)位置；整理工作臺(tái)面，物歸原位，合理丟棄廢液和廢物。

       ⑵ 消毒：用消毒酒精擦拭臺(tái)面；打開超凈工作臺(tái)和細(xì)胞房的紫外燈，照射至少15 min。

       須注意的事項(xiàng)有：紫外燈開啟后，人不能進(jìn)入，紫外線對(duì)眼睛和裸露的皮膚均有危害，若要進(jìn)入，一定要先關(guān)閉紫外燈，待人離開后打開。

       二、環(huán)境

       如果操作者技術(shù)規(guī)范且操作嚴(yán)謹(jǐn)，那么當(dāng)環(huán)境惡化時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致污染風(fēng)險(xiǎn)的增加。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，環(huán)境必須潔凈。

       細(xì)胞污染一個(gè)主要的途徑就是二氧化碳培養(yǎng)箱。二氧化碳培養(yǎng)箱在培養(yǎng)細(xì)胞取出和放入的過程中，直接與空氣接觸，微生物會(huì)被夾帶進(jìn)入；加之其內(nèi)部濕度高、溫度適宜，特別有利于真菌繁殖。細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿，如果接觸了操作臺(tái)以外的地方，在放入培養(yǎng)箱前須經(jīng)消毒酒精擦拭。 但須注意的是，消毒酒精要經(jīng)操作臺(tái)吹干，否則會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)箱內(nèi)乙醇濃度升高，酒精會(huì)影響細(xì)胞的正常功能。

       在很多情況下， 細(xì)胞培養(yǎng)必須使用二氧化碳培養(yǎng)箱。為了有效的控制該污染途徑，可采取的措施有：

       ①在加濕托盤內(nèi)添加真菌抑制劑，如硫酸銅、十二烷基磺酸鈉，可抑制托盤內(nèi)真菌的生長(zhǎng)；亦或盛裝無菌的去離子水，并每周進(jìn)行更換，托盤用消毒酒精或高溫滅菌的方法進(jìn)行嚴(yán)格的清潔；

       ②使用無毒抗真菌清潔劑對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)外進(jìn)行定期清潔，先用清潔劑、再用消毒酒精進(jìn)行擦拭；為不留死角，清潔前應(yīng)將培養(yǎng)箱內(nèi)部能拆卸的部件都拆卸下來，清潔時(shí)也特別要注意不能拆卸的犄角旮旯處；

       ③不正確的使用空氣過濾器，那將變?yōu)榕囵B(yǎng)箱一個(gè)可怕的污染途徑，故須按使用說明定期更換空氣過濾器；

       ④在使用過程中，任何溢出液必須立刻用消毒酒精清除干凈；

       ⑤一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物被污染，立馬清走。