影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡略等優(yōu)點(diǎn)，但是在詳細(xì)實(shí)驗過程中影響要素較多，而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求，在臨床檢驗中除正常反響外，有時?？梢姷揭恍╁e誤成果（即假陽性或假陰性成果）。
影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有：
①標(biāo)本要素；
②試劑要素；
③操作要素。
一、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結(jié)合，然后導(dǎo)致假陽性。
解決辦法:
1.用F（ab）2替代完好的IgG；
2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用）；
3.檢測抗原時，能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
二、補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后形成假陽性。
解決辦法:
1.用EDTA稀釋標(biāo)本；
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig（s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能形成假陽性。
解決辦法:
可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig（s），但加入量不足或亞類不同時無效。
四、嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。
解決辦法:
測定前需用理化方法將其解離后再測定。