細胞破碎的方法有哪些？

標簽：細菌細胞壁  細胞破碎 細胞裂解
  細胞學實驗中，尤其是植物細胞實驗，常常會遇到的細胞裂解的相關(guān)實驗，目的是通過機械貨非機械的方法打破細胞壁的束縛，從而在進行細胞質(zhì)或細胞核內(nèi)部完成DNA編輯相關(guān)操作的一種實驗方法。細胞破碎的方法有哪些?總結(jié)方法主要有以下8種：
一、細胞破碎的機械方法
機械細胞破壞實際上就是這樣：通過固體或液體剪切的方式強行打開細胞壁并溢出內(nèi)容物。機械破碎的優(yōu)點是不會引入可能干擾您想要提取的物質(zhì)的化學物質(zhì)。然而，容易造成大分子內(nèi)容物失活。
1.研缽和研杵
研磨破壁法通常是將植物組織樣本放在置于冷凍液氮中，通過組織研磨器的研磨來完成的。當組織材料被破壞時，可以通過添加溶劑來提取代謝物。
2.珠磨法
珠磨法是指在等量的細胞懸液和渦旋混合器中加入玻璃珠或磁珠用于通過固體剪切的作用來使細胞裂解的方法。這種細胞裂解法的機械剪切力足夠溫和，可以保持細胞器的完整性，具有較高的細胞破碎率可大規(guī)模使用，適 用于各種細胞破碎。缺點是：大分子內(nèi)容物較易失活，并且漿液分離較為困難。
3.超聲波破碎儀
超聲波均質(zhì)器的工作原理是在浸入細胞溶液中的鈦探針中引起振動。發(fā)生稱為空化的過程，其中微小氣泡形成并爆炸，產(chǎn)生局部沖擊波并通過壓力變化破壞細胞壁。這種方法非常適用于植物和真菌細胞，但有一個缺點：噪音較大，所以使用時，必須在額外的房間內(nèi)進行。
4.均質(zhì)機破碎法
均質(zhì)器在細胞上使用類似于珠法的剪切力。可以通過將細胞擠壓到比它們略小的管子中來進行均質(zhì)化，從而剪掉外層（法壓）或使用攪拌機中的旋轉(zhuǎn)刀片（轉(zhuǎn)子-定子處理器）。
5.冷凍破碎法
凍融循環(huán)通過在解凍時形成冰晶和細胞膨脹來起作用，最終導(dǎo)致破裂。用于藻類和軟植物材料。缺點是非常耗時。
6.高溫（微波、高壓釜）破碎法
高溫（和壓力）會破壞細胞壁內(nèi)的鍵，也會使蛋白質(zhì)變性。盡管速度很快，但如果您的應(yīng)用受到熱對電池其余部分的損害影響，您最好找到另一種方法。

二、 非機械細胞破碎的方法有哪些?
     非機械方法會涉及到添加分解細胞壁成分相關(guān)的酶或化學品。它們通常與機械力結(jié)合使用，以確保*破壞細胞。使用它們的缺點是細胞裂解后較難將細胞從這些物質(zhì)中分離出來。
1.酵素
    天然存在的酶可用于去除細胞壁，例如在分離原生質(zhì)體（無壁細胞）時。根據(jù)您使用的生物組織樣本，可以使用 纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、溶菌酶（破壞肽聚糖）、甘露糖酶、聚糖酶（等）等溶菌酶。
2.化學品
    醇、醚或氯仿等有機溶劑可以通過滲透細胞壁和細胞膜來破壞細胞壁。如果您想提取疏水性分子（如植物色素），它們會較為方便，因為它們會被收集在溶劑中。通常用于植物成分的萃取。EDTA主要用于破壞革蘭氏陰性細菌的細胞壁，因為 其細胞壁含有脂多糖，這些脂多糖由 Mg 2+和 Ca 2+等陽離子穩(wěn)定。EDTA 會螯合陽離子，從而在細胞壁上留下孔洞，使外來基因輕松穿透細胞壁到達細胞內(nèi)部。

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