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分散酶II（中性蛋白酶）是一種氨基酸內(nèi)肽酶，可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見(jiàn)于膠原蛋白。分散酶II 具有溫和的蛋白水解作用，可用于原代細(xì)胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶II 相對(duì)溫和，在生理溫度和 pH 值下具有良好的解離能力，通常可維持細(xì)胞膜完整性。
分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細(xì)胞外基質(zhì)釋放單細(xì)胞培養(yǎng)物(原代細(xì)胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細(xì)胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上(傳代培養(yǎng))。
分散酶II可應(yīng)用于組織的解離，具體步驟如下：
1、用無(wú)菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊。
2、用無(wú)菌PBS清洗組織塊。
3、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml)，并確保組織塊全部浸沒(méi)于Dispase溶液中。
4、37°C孵育，孵育過(guò)程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。（若*一次使用該酶，可通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定需要的總孵育時(shí)間。一般對(duì)于較難解離組織，1h即可達(dá)到分離目的，但更長(zhǎng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí))的孵育也不會(huì)明顯影響細(xì)胞活性。）
5、如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過(guò)無(wú)菌不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾，以分開(kāi)單細(xì)胞與殘留的組織塊。或者待大塊組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。
6、離心沉淀細(xì)胞，倒掉酶溶液;
7、用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。
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