超微量分光光度計(jì)如何檢測蛋白？

蛋白和核酸不一樣，具有很強(qiáng)的多樣性。Protein A280功能應(yīng)用于檢測那些含有Trp、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白，這些蛋白在280nm吸光度明顯。本機(jī)方法不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，而是檢測吸光度后，直接計(jì)算蛋白濃度。

Protein A280顯示紫外吸收光譜，檢測280nm處的吸光度后計(jì)算濃度（mg/ml）。和核酸檢測一樣，Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù)。

Nano-600在基座模式下可以多檢測90mg/ml的BSA而不用稀釋。

當(dāng)檢測樣品的吸光后的光強(qiáng)小于200時(shí)（10mm光程下），軟件會(huì)提示用戶選擇更小的測量光程，以保證測試的準(zhǔn)確性。

決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵，通常情況下，水中的物質(zhì)，如蛋白、鹽離子、去污劑等都會(huì)通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對于大部分樣品來說，1ul的量就足夠用于檢測了，但由于表面張力下降，我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。

可選擇或取消基線校準(zhǔn)。蛋白檢測默認(rèn)的基線校準(zhǔn)波長為340nm，用戶可根據(jù)試驗(yàn)需要輸入不同的校準(zhǔn)波長。在任何情況下，基線都自動(dòng)設(shè)定為選擇波長下的吸光度，所有波長的吸光度讀數(shù)都是減去這個(gè)值的結(jié)果。

注意：基線校準(zhǔn)必須在進(jìn)行樣品檢測之前設(shè)定，樣品檢測之后設(shè)定無效。不選擇基線校準(zhǔn)，光譜值將會(huì)產(chǎn)生偏移，計(jì)算的濃度也會(huì)改變。

⑵操作步驟：

①設(shè)定項(xiàng)目名稱和樣品編號與蛋白類型；

②使用緩沖液建立空白對照：取2ul空白溶液加到下基座上，放下上基座并點(diǎn)擊“空白”；

③使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈；

④取2ul樣品滴加到下基座上，放下上基座，點(diǎn)擊“樣品”進(jìn)行檢測；

注意：每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

⑤檢測完成后，必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品，才可以檢測下一個(gè)樣品。