如何練就細(xì)胞計數(shù)神功?

對于大多數(shù)需使用細(xì)胞系的操作，如轉(zhuǎn)染、細(xì)胞融合技術(shù)、冷凍保存和傳代培養(yǎng)等，有必要在操作前對細(xì)胞數(shù)進行定量。因為如果接種細(xì)胞的密度過高，實驗還沒結(jié)束細(xì)胞就會出現(xiàn)接觸抑制，影響細(xì)胞狀態(tài)，蛋白的表達也會受到影響；但如果密度過低最后收集到的樣品過少，檢測不到，我們要花額外的時間等待細(xì)胞長到合適的密度。

使用相同數(shù)量的細(xì)胞將保持最佳生長，并有助于使用細(xì)胞培養(yǎng)的程序標(biāo)準(zhǔn)化，這反過來也使結(jié)果具有更好的再現(xiàn)性。所以細(xì)胞計數(shù)非常重要，它是一個實驗成功的基礎(chǔ)。

文章開頭提到的血球計數(shù)板是以往細(xì)胞計數(shù)常用的方式，它的使用較為耗時，還易受操作者主觀判斷的影響，并且某些細(xì)胞類型，如形成簇的細(xì)胞類型，難以用這種方法計數(shù)。

現(xiàn)有的細(xì)胞計數(shù)設(shè)備可提供替代的細(xì)胞定量方法，這就包括我們的Scepter™細(xì)胞計數(shù)儀。

Scepter™細(xì)胞計數(shù)儀采用“計數(shù)金標(biāo)準(zhǔn)”庫爾特原理。

最大的特點是：

基于細(xì)胞直徑以及樣品濃度的感應(yīng)器選擇指南：

人體細(xì)胞中最小的是血小板，直徑只有約2微米；最大的是成熟的卵細(xì)胞，其直徑在200微米左右，鴕鳥卵細(xì)胞甚至可以達到長15～22厘米,直徑14至15厘米。細(xì)胞的直徑和大小會直接影響覆蓋度百分比，同樣的接種濃度，COS7和293細(xì)胞最終的覆蓋度有著極大的區(qū)別。

讓我們來看看在分離PBMC后和流式直接對比的數(shù)據(jù)：

外周血單個核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有單個核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。外周血單個核細(xì)胞主要的分離方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖－泛影葡胺)密度梯度離心法。

離心獲得PBMC后分別染色通過流式進行分群(Lymphocyte 和Monocyte)和計數(shù)，ScepterTM3.0的結(jié)果和流式在趨勢上具有很好的相關(guān)性。