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世界醫(yī)藥品銷售額排行中位于前百的產(chǎn)品中，生物藥占據(jù)了50%，而抗體藥更是在銷售額排行的前20種藥品中占了9種。近年來(lái)，醫(yī)藥界正在研發(fā)小分子抗體，這種抗體不但保持了抗體的高度特異性，其分子量還小于完整的抗體。小分子抗體有許多種類，除了抗體片段（Fab）以外，在利用基因工程技術(shù)制備的人工抗體中，還有單鏈抗體（scFv）、串聯(lián)單鏈抗體（tandem scFv）、更為單純的雙鏈抗體(diabody)等。
這些小分子抗體不含有Fc片段，所以無(wú)法用Protein A填料進(jìn)行親和純化。因此，使用與Fab片段的Kappa輕鏈（kappa Light chain）結(jié)合的Protein L填料，能夠有效進(jìn)行親和純化。TOYOPEARL AF-rProtein L-650F具有抗體吸附載量高，耐堿性優(yōu)異的特點(diǎn)。可用0.1 mol/L NaOH溶液清洗，所以與傳統(tǒng)的Protein L填料相比，更有利于提高生產(chǎn)能力和降低生產(chǎn)成本。
● 高載量型TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的產(chǎn)品特性
參數(shù) | 規(guī)格 |
粒徑 (μm) | 30 – 60 |
配體 | 重組Protein L (由大腸桿菌表達(dá)） |
配體固定化 | 多點(diǎn)結(jié)合 |
IgG吸附載量 (靜態(tài)) | ＞64 g/L |
微生物量 | |
菌體數(shù) (CFU/mL) | ＜100 |
內(nèi)毒素 (EU/mL) | ＜10 |
異物 | ＜6 |
溶出物 | ＜0.2 % |
● TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的優(yōu)勢(shì)
?高吸附載量 ：是市售Protein L填料載量的約1.5倍
?提高耐堿性 ：可用0.1 mol/L NaOH清洗，可重復(fù)使用
?低配體脫落量 ：Protein L配基為多點(diǎn)結(jié)合，填料配基脫落率較低
?高速分離、處理 ：填料骨架剛性強(qiáng)，所以可用大口徑柱進(jìn)行高流速分離（駐留時(shí)間約為2-3分鐘）
?提高生產(chǎn)能力 ：高載量、耐堿性，可在生產(chǎn)中降低填料的成本
?穩(wěn)定提供 ：可確保穩(wěn)定提供超過(guò)10 L的大量填料
?篩選用預(yù)裝柱 ：提供1 mL和5 mL預(yù)裝柱，用于工藝開發(fā)
● 使用Protein L填料純化抗體分離單鏈抗體（scFv）和tandem scFv的分離條件舉例：
吸附溶液：0.02-0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液 (pH 6.5)
淋洗：
scFv、tandem scFv（CHO細(xì)胞培養(yǎng)液）：含有0.25-1 mol/L精氨酸和5-10 %異丙醇的吸附溶液
scFv（大腸桿菌的包涵體）：含有2 mol/L鹽酸胍的吸附溶液*
洗脫：0.1 mol/L 檸檬酸或甘氨酸/HCl (pH 2.0-pH 3.0)
清洗：酸性溶液 pH 2.0-pH 2.2
CIP： 0.05–0.1 mol/L NaOH，接觸時(shí)間為10–15分鐘（限定使用濃度不超過(guò)0.1 mol/L NaOH水溶液）
（用0.1 mol/L NaOH水溶液浸泡9小時(shí)后，吸附量仍維持 90 %）
10–20 %乙醇和異丙醇也可有效去除疏水性雜質(zhì)
* Reference：Tosoh Bioscience LLC Application Note, Capture of a scFv from E.coli using TOYOPEARL® AF-rProtein L-650F
● 使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F純化 CHO細(xì)胞培養(yǎng)液中tandem scFv抗體，對(duì)其吸附載量和淋洗的效果
樣品載量 (mg) | 吸附 中間清洗液 pH |
中間清洗液 |
洗脫液pH | 回收率 (%) | 單體 (相對(duì)%) | 聚集體 (相對(duì)%) | 抗體片段 (相對(duì)%) |
HCP (ppm) |
DNA (ppm) | 脫落的 Protein L (ppm)* |
Feed | - | - | - | - | 24.6 | 63.2 | 12.3 | 14,782,068 | 2,676 | - |
5 | 6.5 | - | 2.85 | 86.9 | 94.5 | 5.1 | 0.4 | 7,341 | 7 | < LOD |
5 | 6.5 | + 0.25 M Arg | 2.85 | 85.5 | 93.4 | 6.1 | 0.5 | 6,872 | 2 | < LOD |
5 | 6.5 | + 0.25 M Arg + 5% iPrOH | 2.85 | 85.4 | 93.9 | 5.7 | 0.4 | 6,016 | 1 | < LOD |
20 | 6.5 | - | 2.85 | 83.4 | 83.4 | 16.1 | 0.4 | 10,522 | 3 | < LOD |
20 | 6.5 | + 0.25 M Arg | 2.85 | 90.1 | 80.8 | 18.7 | 0.4 | 8,368 | 2 | < LOD |
20 | 6.5 | + 0.25 M Arg + 5% iPrOH | 2.85 | 90.1 | 82.9 | 16.8 | 0.4 | 6,966 | 1 | < LOD |
Buffer; 0.1 mol/L sodium citrate buffer (pH 6.5) LOD; Limit of detection
Column size; 1 mL
※使用添加精氨酸（Arg）和異丙醇（iPrOH）的溶液進(jìn)行淋洗，有效去除了HCP、DNA等雜質(zhì)。
● Protein L純化后的層析步驟
在Protein L填料純化后的下一個(gè)步驟中使用以下其他模式的填料，能夠進(jìn)一步有效去除雜質(zhì)。
?離子交換填料 ：TOYOPEARL NH2-750F、Sulfate-650F（耐鹽性離子交換填料）
?疏水填料 ：TOYOPEARL PPG-600M、Phenyl-600/650M、Butyl-600/650M、Hexyl-650C
?混合模式填料 ：TOYOPEARL MX-Trp-650M
● Protein L填料和篩選用預(yù)裝柱產(chǎn)品一覽表
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 吸附載量 （g/L） | 包裝規(guī)格 | 備注 |
0023486 | TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | ≥ 64 | 10 mL | 填料（瓶） |
0023487 | TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | ≥ 64 | 25 mL | 填料（瓶） |
0023488 | TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | ≥ 64 | 100 mL | 填料（瓶） |
0023494 | ToyoScreen AF-rProtein L-650F | - | 1 mLX 5 | 預(yù)裝柱，需要使用ToyoScreen Holder（柱套） |
0023495 | ToyoScreen AF-rProtein L-650F | - | 5 mLX 1 | 預(yù)裝柱，需要使用ToyoScreen Holder（柱套） |
0023496 | ToyoScreen AF-rProtein L-650F | - | 5 mLX 1 | 預(yù)裝柱，需要使用ToyoScreen Holder（柱套） |
0045162 | MiniChrom AF-rProtein L-650F | - | 5 mL | 預(yù)裝柱，8 mm I.D. x 10 cm |
0045065 | RoboColumn AF-rProtein L-650F | - | 200 uL X 8 | 98微孔板專用 |
0045066 | RoboColumn AF-rProtein L-650F | - | 600 uL X 8 | 98微孔板專用 |
0021400 | ToyoScreen Holder | - | - | 柱套，轉(zhuǎn)接頭（入口1 mL專用），（入口5 mL專用），轉(zhuǎn)接頭（出口）各1個(gè)， 堵頭2個(gè) |
※ 如需購(gòu)買Protein L填料的配基脫落檢測(cè)套裝，請(qǐng)咨詢我公司銷售人員或代理。
※ 純化完整的抗體，請(qǐng)使用高載量、耐堿型的TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F填料 。
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