指南 | Lonza 電轉(zhuǎn)條件優(yōu)化指南及常見問題

本期我們將為您提供優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件的指南，及有關(guān)該主題的常見問題。

Q：Nucleofector™ I 或 II 條件是否與 4D-Nucleofector™ X 單元兼容？
4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)基于升級后的 Nucleofector™ 技術(shù)，并具有以下主要改進：
· 兩種 Nucleofection™ 體系(20ul和100ul)，且實驗條件可以互相轉(zhuǎn)移
· Nucleocuvette™ 由導(dǎo)電聚合物而非鋁組成，提高了細胞活力
· 簡化的 4D-Nucleofector™ 試劑
· 更廣泛的程序來微調(diào)您的優(yōu)化
由于這些差異，為 Nucleofector™ I 或 II 設(shè)備推薦的解決方案對 4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)無效。然而，在 4D-Nucleofector™ X 單元上運行優(yōu)化是一個潛在改善 Nucleofection™ 結(jié)果的好機會。

Q：可以優(yōu)化哪些參數(shù)？
· 在 Nucleofection™ 優(yōu)化中，最重要的參數(shù)是 Nucleofector™ 試劑和程序。

Q：我應(yīng)該使用什么底物進行優(yōu)化？
· 無論您感興趣的底物（質(zhì)粒、siRNA、蛋白質(zhì)或化合物）如何，我們始終建議使用我們的 pmaxGFP™ 載體進行優(yōu)化。使用 pmaxGFP™ Vector 進行優(yōu)化消除了許多變量，例如底物制備的性質(zhì)和質(zhì)量以及分析時間。

Q：我應(yīng)該以什么 Nucleofection™ 體系進行優(yōu)化？
· 4D-Nucleofector™ X 單元旨在簡化優(yōu)化步驟。我們建議使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 進行優(yōu)化，減少珍貴細胞的消耗。確定最佳條件后，您可以使用相同的方案，通過將細胞數(shù)量和底物數(shù)量乘以 5 來簡單地切換到 100 μl Nucleocuvette™。

Q：如何優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元上的 Nucleofection™ 條件？
首先我們將訪問Lonza 開放的數(shù)據(jù)庫，查找相關(guān)程序及方案。
當您的細胞沒有推薦的方案時，將適用以下三種情況之一：
· 如果沒有任何可用的建議，則開始第一輪優(yōu)化。幾種 Nucleofector™ 試劑（原代細胞的 P1 至 P5 和細胞系的 SE、SF 和 SG）中的每一種都將使用 15 個不同的程序進行測試。
· 遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 單元方案（如果有）。使用少量的程序 (6–7個) 測試一個或兩個 Nucleofector™ 試劑。
· 數(shù)據(jù)庫描述了 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件和數(shù)據(jù)。您可以選擇測試它們或返回前兩個選項之一。

Q：何進一步改善我的 Nucleofection™ 條件？
一旦從第一輪優(yōu)化中獲得 Nucleofection™ 的結(jié)果，您可以使用我們基于 Web 的優(yōu)化表格請求我們的反饋，或?qū)⒛慕Y(jié)果通過電子郵件發(fā)送
參考下方的優(yōu)化策略，可能會改善您的 Nucleofection™ 結(jié)果：
· 在表格中選擇效果好的初始程序（例如 DN-100）。表格中間垂直列出的是第一輪優(yōu)化中描述的 15 個程序。
· 使用所選程序左側(cè)的程序來提高細胞活力（例如 DH-100）。使用右側(cè)的程序來提高轉(zhuǎn)染效率（例如 ER-100）