核酸標準物質(zhì)（質(zhì)控品）的管控和使用

在《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》，《三級綜合醫(yī)院評審標準（2011 年版）》等文件中，都指出在臨床檢測報告的項目均應(yīng)開展內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控，并參加外部室間質(zhì)評。在這兩項工作當中，標準物質(zhì)的作用尤為重要，對它的管控不可/或缺。

(一) 、標準物質(zhì)（質(zhì)控品）的來源與基本條件

分子實驗室中，一般將標準物質(zhì)分成兩類：

1、用于儀器校準、驗證、測試和繪制工作標準曲線等目的的標準物質(zhì)；（一般是由廠商提供的質(zhì)控品）

2、用于外部室間質(zhì)評、內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控、方法驗證等目的的標準物質(zhì)，而在《2021 臨床醫(yī)學檢驗技術(shù)（士）》的中，這類標準物質(zhì)又分為標準品、質(zhì)控品。（一般為第三方提供的標準品、實驗室自制質(zhì)控品。）對于這類標準物質(zhì)的要求，結(jié)合 GB/T 20468-2006《臨床實驗室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南》，整理如下：

① 基質(zhì)：應(yīng)盡可能與臨床樣本的基質(zhì)相似或一樣，不同基質(zhì)中可能含有不*一致的基因擴增檢測抑制物，應(yīng)對測定結(jié)果無影響。

② 濃度：在測定范圍內(nèi)，質(zhì)控品要求其所含待測物的濃度盡可能接近試驗或臨床決定性水平。

③ 具備均勻性和穩(wěn)定性，瓶間變異性應(yīng)小于分析系統(tǒng)的變異，在規(guī)定的條件下有良好的穩(wěn)定性。

④ 靶值或預(yù)期結(jié)果已知。

⑤ 無已知的生物傳染危險。

⑥ 可單批大量獲得，因室內(nèi)質(zhì)控是連續(xù)測定同一質(zhì)控品，以監(jiān)測實驗室測定的重復(fù)性（可大量持續(xù)供應(yīng)）。

(二) 、標準物質(zhì)（質(zhì)控品）的驗收與保存

1、參照 JJF 1507-2015 《標準物質(zhì)的選擇與應(yīng)用技術(shù)規(guī)范》（以下簡稱「JJF1507-2015」）有相關(guān)描述，整理如下：

在接收標準物質(zhì)時，應(yīng)對照提供的說明確認其運輸條件和接收狀態(tài)，并立即按照說明規(guī)定的保存條件進行保存，并在保質(zhì)期內(nèi)使用（參考 JJF1507-2015 10.1.1、10.1.3）。對于核酸標準物質(zhì)，在《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則》的“臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項”中提到“試劑儲存和準備區(qū)。試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當保存在該區(qū)，應(yīng)當保存在標本處理區(qū)。

2、對于可多次使用的標準物質(zhì)，確保包裝單元開封后的恰當保存和包裝、標簽、說明規(guī)定的完整性非常重要，必要時，應(yīng)對剩余的物質(zhì)進行重新密封包裝（參考 JJF1507-2015 10.1.2、10.2.4）。

3、對于僅供一次使用的標準物質(zhì)，在打開包裝后應(yīng)按照要求盡快使用，不能留存后反復(fù)使用（參考 JJF1507-2015 10.1.3）。

（三）、標準物質(zhì)的使用

參照 JJF1507-2015 有使用方面的相關(guān)描述，整理如下：

1、使用前準備：

在規(guī)定的程序條件和測量條件達到穩(wěn)定后，使用標準物質(zhì)，否則將造成標準物質(zhì)的誤用，并可能產(chǎn)生錯誤的結(jié)論（參考 JJF1507-2015 10.2.1、10.2.5）

2、預(yù)處理

對于需通過混合、稀釋、分裝等預(yù)處理后的標準物質(zhì)，需要對不確定度的來源進行控制，如溶質(zhì)或溶劑的揮發(fā)性損失、包裝和環(huán)境，還有測定方法、緩沖液、最終結(jié)果的統(tǒng)計學評價和質(zhì)量控制等。為確保特性值的正確傳遞，避免預(yù)處理過程因素的影響，建議對預(yù)處理進行驗證評估，必要時建立不確定度評估程序，以確保不確定度的合理量化。（參考 JJF1507-2015 6.3.3、10.2.6、《2021 臨床醫(yī)學檢驗技術(shù)（士）》）

注：ISO 指南 34 和 35 對標準物質(zhì)的穩(wěn)定性評估進行了詳細闡述，上述兩份指南已轉(zhuǎn)化為國家計量技術(shù)規(guī)范 JJF1342《標準物質(zhì)研制（生產(chǎn)）機構(gòu)通用要求》和 JJF1343《標準物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學原理》，同時，在體外診斷試劑方面有發(fā)布 YY/T 1652《體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求》，均可作為參考文件。

3、取樣

標準物質(zhì)在取樣時應(yīng)確保代表性，如果規(guī)定了取樣之前必要的均勻化措施，如混勻等，應(yīng)嚴格執(zhí)行。

如果規(guī)定了標準物質(zhì)的最小取樣量，那么使用標準物質(zhì)時的實際取樣量應(yīng)不低于標準物質(zhì)的最小取樣量，當小于最小取樣量時，其特性值和不確定度等參數(shù)可能會由于標準物質(zhì)的不均勻性而不再有效。（參考 JJF1507-2015 10.2.2），取樣時應(yīng)采取防止污染的措施（參考 JJF1507-2015 10.2.4）

對于核酸標準物質(zhì)的使用，還需注意：

（1）對于液體狀態(tài)，在開蓋前離心以防產(chǎn)品損耗，并按照說明中的稀釋、分裝建議進行操作。

（2）對于石蠟切片（如 FFPE），應(yīng)對核酸提取步驟，應(yīng)建立技術(shù)標準、操作與質(zhì)控規(guī)程并保存過程記錄。

（3）凍干狀態(tài)的核酸標準物質(zhì)的在進行復(fù)溶時，所加溶劑的量要準確，每次加入的量盡量一致，應(yīng)輕輕搖勻，使內(nèi)容物*溶解，切忌劇烈振搖。

4、使用

對于定性檢測，通常有弱陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品可以滿足要求。

對于定量檢測，則要根據(jù)實驗的測定范圍。使用陽性不但可檢測擴增反應(yīng)液的質(zhì)量，還可獲得檢測試劑的檢測的下限信息。使用陰性主要目的是監(jiān)測污染，包括實驗室以前的擴增產(chǎn)物的污染、有實驗操作所致的標本之間的交叉污染、擴增反應(yīng)試劑的污染等。