純水及超純水機在細胞培養(yǎng)中的應用

       水是細胞賴以生存的主要環(huán)境，營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水中，才能為細胞吸收和排泄。對于體外培養(yǎng)的細胞來說，水是所有細胞培養(yǎng)用液和試劑中較簡單、但也是最重要的組分。細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高，培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì)，即使含量極微，有時候也會影響細胞的存活和生長，甚至導致細胞死亡。



水中的雜質(zhì)對水質(zhì)有不同影響：

• 離子，平衡滲透壓；

• 微生物，污染，改變微壞境如pH，影響增殖，死后釋放內(nèi)毒素等；

• 內(nèi)毒素，改變細胞外形、活化細胞、促進或抑制細胞分裂、影響細胞附著等；

• 有機物，水中有機物所含碳的總量可間接反映出水中細菌和內(nèi)毒素的含量，應控制在合理范圍內(nèi)，以免影響細胞培養(yǎng)。

水質(zhì)評價常用的指標：

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• 電阻率（electrical resistivity），衡量實驗室用水導電性能的指標，單位為MΩ·cm，隨著水內(nèi)無機離子的減少電阻數(shù)值逐漸變大；

• 異體菌落數(shù)（heterotrophic bacteriacount，HBC），衡量實驗室用水微生物的指標，單位為cfu/ml

• 有機物（total organic carbon，TOC），水中碳的濃度，反映水中可氧化的有機化合物的含量，單位為μg/L或ppd；

• 內(nèi)毒素（endotoxin），革蘭氏陰性菌的脂多糖細胞壁碎片，又稱為“熱原”，單位EU/ml。

參考國際標準化組織的實驗室純水規(guī)范ISo3696，美國臨床試驗室標準化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute）及美國試驗和材料學會（American Society for Testing and Materials）D1193的試劑純水規(guī)范，我國GBT6682和GBT30301的實驗用水指導，結合實際的實驗操作經(jīng)驗?？偨Y細胞培養(yǎng)的水質(zhì)要求 ：

• 一定要無菌，HBC＜0.1cfu/ml；

• 無蛋白及核酸酶和內(nèi)黑素；

• 無內(nèi)毒素或無熱源，＜0.001EU/ml；

• TOC＜3ppd，一些重金屬（鎘）毒害大，即便是很低劑量（＜0.1ppd）也有影響；

• 電阻率≥18MΩ.cm

細胞培養(yǎng)以及各種培養(yǎng)液和試劑的配置用水均需要經(jīng)過嚴格的純化處理；即使是玻璃器皿，在用自來水清洗過后也應至少用超純水漂洗三次以上。
目前，市場上供應的純水裝置種類較多， 比如自來水進水同時制備二級純水和超純水的一體化純水裝置，可以由自來水進水通過預處理柱、反滲透柱及電去離子（EDI）模塊等純化后達到二級純化水，儲存于水箱中以滿足日常的清洗；水箱中的水再經(jīng)過超純化柱去離子，紫外燈照射殺菌和降低有機物，最后經(jīng)終端除內(nèi)毒素濾器達到無菌無熱源的超純水。




純水的儲存對保持水的質(zhì)量也是至關重要的，由于周圍環(huán)境和空氣中的二氧化碳更容易使水污染改變其pH，所以儲存水的容器要盡量密封，避免和外界過多接觸，抑制微生物生長。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機水箱中內(nèi)置紫外燈和二氧化碳吸附濾器長期保證水箱中純水的水質(zhì)。

對于超純水而言尤其需要格外注意終端水質(zhì)的TOC、電阻率、細菌和內(nèi)毒素的含量，必須做到即取即用。因此取水水質(zhì)實時監(jiān)測顯得尤為重要。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機擁有7" 彩色觸摸顯示屏，可以顯示各階段水質(zhì)等重要參數(shù)和耗材更換倒計時，操作簡單直觀。UV燈、TOC監(jiān)測和UF超濾模塊保證了優(yōu)秀的水質(zhì)。這些裝置可有效去除 RNase、DNase 和DNA 等污染物。并可使內(nèi)毒素水平低于 0.001EU/ml。


EVOQUA 懿華，Ultra Clear TP ED 20 TWF EDI 30 UV UF TM 超純水機


【注意事項】

1. 超純水應當注意使用時間，最好即取即用。防止超純水吸取外界的雜質(zhì)導致水質(zhì)下降。

2. 在合適的環(huán)境使用超純水。環(huán)境中的揮發(fā)性有機物、細菌等都會影響細胞培養(yǎng)。

3. 培養(yǎng)細胞的容器應當潔凈無污染。