純水及超純水機(jī)在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

       水是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水中，才能為細(xì)胞吸收和排泄。對(duì)于體外培養(yǎng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，水是所有細(xì)胞培養(yǎng)用液和試劑中較簡(jiǎn)單、但也是最重要的組分。細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高，培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì)，即使含量極微，有時(shí)候也會(huì)影響細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。



水中的雜質(zhì)對(duì)水質(zhì)有不同影響：

• 離子，平衡滲透壓；

• 微生物，污染，改變微壞境如pH，影響增殖，死后釋放內(nèi)毒素等；

• 內(nèi)毒素，改變細(xì)胞外形、活化細(xì)胞、促進(jìn)或抑制細(xì)胞分裂、影響細(xì)胞附著等；

• 有機(jī)物，水中有機(jī)物所含碳的總量可間接反映出水中細(xì)菌和內(nèi)毒素的含量，應(yīng)控制在合理范圍內(nèi)，以免影響細(xì)胞培養(yǎng)。

水質(zhì)評(píng)價(jià)常用的指標(biāo)：

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• 電阻率（electrical resistivity），衡量實(shí)驗(yàn)室用水導(dǎo)電性能的指標(biāo)，單位為MΩ·cm，隨著水內(nèi)無(wú)機(jī)離子的減少電阻數(shù)值逐漸變大；

• 異體菌落數(shù)（heterotrophic bacteriacount，HBC），衡量實(shí)驗(yàn)室用水微生物的指標(biāo)，單位為cfu/ml

• 有機(jī)物（total organic carbon，TOC），水中碳的濃度，反映水中可氧化的有機(jī)化合物的含量，單位為μg/L或ppd；

• 內(nèi)毒素（endotoxin），革蘭氏陰性菌的脂多糖細(xì)胞壁碎片，又稱為“熱原”，單位EU/ml。

參考國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織的實(shí)驗(yàn)室純水規(guī)范ISo3696，美國(guó)臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute）及美國(guó)試驗(yàn)和材料學(xué)會(huì)（American Society for Testing and Materials）D1193的試劑純水規(guī)范，我國(guó)GBT6682和GBT30301的實(shí)驗(yàn)用水指導(dǎo)，結(jié)合實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)?？偨Y(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的水質(zhì)要求 ：

• 一定要無(wú)菌，HBC＜0.1cfu/ml；

• 無(wú)蛋白及核酸酶和內(nèi)黑素；

• 無(wú)內(nèi)毒素或無(wú)熱源，＜0.001EU/ml；

• TOC＜3ppd，一些重金屬（鎘）毒害大，即便是很低劑量（＜0.1ppd）也有影響；

• 電阻率≥18MΩ.cm

細(xì)胞培養(yǎng)以及各種培養(yǎng)液和試劑的配置用水均需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的純化處理；即使是玻璃器皿，在用自來(lái)水清洗過(guò)后也應(yīng)至少用超純水漂洗三次以上。
目前，市場(chǎng)上供應(yīng)的純水裝置種類較多， 比如自來(lái)水進(jìn)水同時(shí)制備二級(jí)純水和超純水的一體化純水裝置，可以由自來(lái)水進(jìn)水通過(guò)預(yù)處理柱、反滲透柱及電去離子（EDI）模塊等純化后達(dá)到二級(jí)純化水，儲(chǔ)存于水箱中以滿足日常的清洗；水箱中的水再經(jīng)過(guò)超純化柱去離子，紫外燈照射殺菌和降低有機(jī)物，最后經(jīng)終端除內(nèi)毒素濾器達(dá)到無(wú)菌無(wú)熱源的超純水。




純水的儲(chǔ)存對(duì)保持水的質(zhì)量也是至關(guān)重要的，由于周圍環(huán)境和空氣中的二氧化碳更容易使水污染改變其pH，所以儲(chǔ)存水的容器要盡量密封，避免和外界過(guò)多接觸，抑制微生物生長(zhǎng)。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機(jī)水箱中內(nèi)置紫外燈和二氧化碳吸附濾器長(zhǎng)期保證水箱中純水的水質(zhì)。

對(duì)于超純水而言尤其需要格外注意終端水質(zhì)的TOC、電阻率、細(xì)菌和內(nèi)毒素的含量，必須做到即取即用。因此取水水質(zhì)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)顯得尤為重要。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機(jī)擁有7" 彩色觸摸顯示屏，可以顯示各階段水質(zhì)等重要參數(shù)和耗材更換倒計(jì)時(shí)，操作簡(jiǎn)單直觀。UV燈、TOC監(jiān)測(cè)和UF超濾模塊保證了優(yōu)秀的水質(zhì)。這些裝置可有效去除 RNase、DNase 和DNA 等污染物。并可使內(nèi)毒素水平低于 0.001EU/ml。


EVOQUA 懿華，Ultra Clear TP ED 20 TWF EDI 30 UV UF TM 超純水機(jī)


【注意事項(xiàng)】

1. 超純水應(yīng)當(dāng)注意使用時(shí)間，最好即取即用。防止超純水吸取外界的雜質(zhì)導(dǎo)致水質(zhì)下降。

2. 在合適的環(huán)境使用超純水。環(huán)境中的揮發(fā)性有機(jī)物、細(xì)菌等都會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)。

3. 培養(yǎng)細(xì)胞的容器應(yīng)當(dāng)潔凈無(wú)污染。