小鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書

小鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況，酌情處理。

一．小鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞貼壁細(xì)胞
　　客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。
　　肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
　　顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
　　嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
　　將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完，全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
　　用PBS2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
　　1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

二．小鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞懸浮細(xì)胞
　　1.接收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。
　　2.肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
　　3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
　　4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完，全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
　　5.1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)