貼壁細胞怎么高效傳代？

貼壁生長的細胞，在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細胞生長、增殖受阻，為使其繼續(xù)擴增或生長，需要進行傳代（再培養(yǎng)）處理。同時，傳代培養(yǎng)也可用于細胞種的保存。不僅如此，各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎的。

懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞則需經消化等處理后才能分瓶。一般使用胰蛋白酶，將貼壁細胞消化成成單個細胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+）。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實驗時，先用吸去細胞培養(yǎng)上清，用PBS清洗細胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據培養(yǎng)皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿整個皿底為原則)，觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要3-5分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化，細胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產生損傷，對于這種類型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細胞，然后進行傳代培養(yǎng)。

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