ELISA和WB該如何選擇，怎樣才能做好ELISA

近期實(shí)驗(yàn)室的大家都不約而同地拼搏在ELISA前線,ELISA好做么?ELISA是不是什么蛋白都能檢測(cè)?那能不能不跑WB了?面對(duì)這一番提問，突然覺得是時(shí)候整理一下關(guān)于ELISA的實(shí)驗(yàn)技能，以備大家不時(shí)之需!

首先ELISA是什么，相信只要本科醫(yī)學(xué)的小伙伴們，就算不知道ELISA是干嘛的，也能答出來(lái)抗原抗體反應(yīng)，ELISA就是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。

一、那么接著一個(gè)重要的問題就是，ELISA和WB如何選擇

相信這個(gè)問題肯定很多人考慮過，其實(shí)我們選擇的時(shí)候只要明白兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)就行。

首先，ELISA抗原抗體都能檢測(cè)，而WB主要檢測(cè)的就是抗原。對(duì)于ELISA主要的特點(diǎn)就是，使用的抗原或抗體是與某種酶連接成的酶標(biāo)抗原或抗體，由于酶的催化效率很高，可以放大反應(yīng)效果，增大檢測(cè)的靈敏度，因此ELISA的檢測(cè)限可以達(dá)到ng級(jí)，但WB顯色敏感度一般在pg級(jí)。同時(shí)ELISA在保證實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定有效的前提下，是一個(gè)很好的定量實(shí)驗(yàn)。對(duì)于我們熟悉的WB實(shí)驗(yàn)，也有一個(gè)非常鮮明的優(yōu)點(diǎn)就是，可以將不同大小的蛋白進(jìn)行分離，根據(jù)目的蛋白的分子量大小預(yù)測(cè)位置進(jìn)行檢測(cè)，這樣我們不僅能夠知道檢測(cè)的蛋白是否是多聚體、降解產(chǎn)物等，也能夠同時(shí)檢測(cè)不止一個(gè)目的蛋白。

同時(shí)我們也應(yīng)該從樣本和目的蛋白種類進(jìn)行考慮，如果需要檢測(cè)的目的蛋白是血漿或血清中的分泌蛋白，那么ELISA可能更適合

二、ELISA實(shí)驗(yàn)過程中需要注意什么?

1.操作過程需牢記

首先，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前要先將試劑盒從冰箱中 恢復(fù)室溫 。加樣時(shí)盡量將液體加入孔底，不要有氣泡， 提供一個(gè)小 tip! 因?yàn)橛袣馀輹?huì)影響吸光度值的測(cè)定，檢測(cè)之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡。洗板時(shí)注意不要間隔太久，盡量 避免干板現(xiàn)象!按照試劑盒批號(hào)和保質(zhì)期使用，不同批次的試劑嚴(yán)禁混合使用，同時(shí)試劑盒使用后 剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存 ，防止潮濕。目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間，使其充分結(jié)合。 (嚴(yán)格按照說明時(shí)間進(jìn)行，防止非特異性結(jié)合，因此小伙伴們還是要多咨詢一下客服! )

三、ELISA數(shù)據(jù)如何處理

首先我們都知道要做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，那么ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線是需要我們擬合曲線得到的，有很多軟件都是可以直接幫助我們合成曲線并進(jìn)行樣本含量計(jì)算的，這里推薦大家?guī)讉€(gè)良心好用的軟件，ELISACalc、origin、Curve Exert、ReaderFit等等。

最后，Elisa并不是簡(jiǎn)單的加樣和檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)方法的選擇也不是圖省事，希望小伙伴們都輕松掌握，快樂實(shí)驗(yàn)，快樂發(fā)paper!