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1、細(xì)胞培養(yǎng)液
(1)細(xì)胞培養(yǎng)水
水的純度通過離子濃度、pH、有機(jī)物、膠體、顆粒物及細(xì)菌的含量等參數(shù)來評定。根據(jù)ISO 3696-1987標(biāo)準(zhǔn)將實(shí)驗(yàn)室用水分3級。體外培養(yǎng)的細(xì)胞對水質(zhì)特別敏感，對水的純度要求較高。培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì)，即使含量極微，有時(shí)也會影響細(xì)胞的存活和生長，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。配制培養(yǎng)用液應(yīng)使用三蒸水或超純水(UPW)(1級水)，存放時(shí)間一般不應(yīng)超過2周。
沖洗玻璃器皿，灌注水浴槽、溫箱中的加濕盤、高壓滅菌鍋用水：滿足2級水及以上，多次蒸餾或離子交換制得。
(2)平衡鹽溶液(balanced salt solution,BSS)
用于維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單營養(yǎng)的溶液。主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，一般用于取材時(shí)組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、分離或配制其他試劑等。如常用的緩沖液：生理鹽水、PBS、Hanks液(常用來配制胰酶溶液)。
(3)培養(yǎng)基
用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)，即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì)，就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。
天然培養(yǎng)基：指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。因制作過程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基還有血清。合成培養(yǎng)基：根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。包括四大類物質(zhì)：無機(jī)鹽、氨基酸、維生素、碳水化合物。
目前常用培養(yǎng)基：MEM、DMEM、RPM1640、M199、F-10、F-12細(xì)胞培養(yǎng)基系列(作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，仍需添加血清)(存在營養(yǎng)成分濃度和多樣性差異，可根據(jù)需要進(jìn)行選擇)。
另有無血清培養(yǎng)基(SFM)通過用適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)和激素成分代替血清，避免使用動物血清帶來的問題。無血清培養(yǎng)基可用于多種原代培養(yǎng)和特殊細(xì)胞系。優(yōu)勢：通過適當(dāng)?shù)纳L因子組合使培養(yǎng)基對特定細(xì)胞種類具有選擇性。
(4)血清
基礎(chǔ)培養(yǎng)基中最重要的細(xì)胞生長和粘附因子,激素、脂質(zhì)、礦物質(zhì)的來源。能促進(jìn)細(xì)胞的生長和細(xì)胞的貼壁，同時(shí)也具有抗胰酶活性。主要成分：各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等。優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)為透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌，支原體，病毒污染。血清的滅活條件56℃，30 min，消除補(bǔ)體活性(根據(jù)血清質(zhì)量決定是否需要滅活)。使用濃度一般為5-20%，最常用是10%。自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，過多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細(xì)胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
常用血清：胎牛血清(FBS)、新生牛血清、小牛血清(CS)、馬血清(HoS)、人血清等
(5)消化液：
蛋白酶溶液：使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解，從而使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落，并使細(xì)胞游離分散開來，常用濃度：0.1%-0.25%胰蛋白酶。EDTA(乙二氨四乙酸)溶液：作用機(jī)制作為螯合劑與鈣黏著蛋白進(jìn)行結(jié)合達(dá)到破壞細(xì)胞間的連接。EDTA使用濃度為0.02%，配置時(shí)應(yīng)加堿助溶，配制后可過濾除菌，也可高溫消毒滅菌；對一些貼壁特別牢的細(xì)胞，可用EDTA和胰酶的混合液, 如0.25% Trypsin-EDTA。膠原酶：作用于膠原組織，對細(xì)胞損傷小。一般多用于組織類及上皮類細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)使用。
(6)抗生素溶液
霉素和鏈霉素聯(lián)合使用，常稱為“雙抗溶液”。青霉素主要對革蘭氏陽性菌有效，鏈霉素對革蘭氏陰性菌有效；這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌污染。通常青霉素使用終濃度0.007-0.008g/100ml,鏈霉素終濃度0.01g/100ml。
2、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)菌、真菌、病毒等微生物的污染。細(xì)菌、支原體、酵母菌、真菌孢子可能通過操作者、空氣、工作臺面、溶液及其他途徑被引入。無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì) 積累，可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無菌無毒，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物。
3、恒定的細(xì)胞生長溫度
動物細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是 37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長。細(xì)胞 耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng)，在低溫下，細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低。若溫度過低，在 降到冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡。但若向培養(yǎng)液中加入甘油或二甲亞砜 等保護(hù)劑，置于液氮中，可起保護(hù)作用，此時(shí)細(xì)胞可耐受-70℃以下溫度，能長期儲存，解凍 后細(xì)胞復(fù)蘇，仍能繼續(xù)生長增殖，細(xì)胞生物性狀不受任何影響。高溫對細(xì)胞培養(yǎng)不利。高溫主要引起酶的滅活、類脂質(zhì)破壞，核分裂的破壞，產(chǎn)生凝固酶使細(xì)胞發(fā)生凝固，另外使蛋白質(zhì)變性。
4、滲透壓
細(xì)胞在高滲溶液或低滲溶液中，可以立即發(fā)生皺縮或腫脹、破裂。所以，滲透壓是體外培 養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。哺乳動物和其他動物組織細(xì)胞體外培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與 NaCl 有關(guān)，但不能忽視其他電介質(zhì)滲透壓的關(guān)系。滲透壓與單位體積溶媒內(nèi)溶質(zhì)的分子數(shù)和離子數(shù) 成正比。為此，按一定比例控制培養(yǎng)液中離子平衡，維持正常滲透壓是很重要的。這不僅是為 了維持細(xì)胞張力，而且是為了調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝。因?yàn)榧?xì)胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質(zhì)的輸送(如氨基酸、蔗糖等)，直接影響細(xì)胞基本合成系統(tǒng)。
理想的滲透壓因細(xì)胞的類型及種族而異，人血漿滲透壓為 290mmol/L，被視為是體外培 養(yǎng)人類細(xì)胞的理想滲透壓。哺乳類動物細(xì)胞的滲透壓一般為 290～300mmol/L。人胚肺成纖維 細(xì)胞為 250～325mmol/L，鼠則為 310mmol/L 左右。在實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L 的滲透壓可適于大多數(shù)細(xì)胞。
5、氣體環(huán)境和 pH
體外培養(yǎng)細(xì)胞需要理想的氣體環(huán)境，氧和二氧化碳是細(xì)胞生存必須的條件之一。氧參加細(xì) 胞的三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量以供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分。有些細(xì)胞在低氧條件 下，可借糖酵解取得能量，但多數(shù)細(xì)胞低氧時(shí)不能生存。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài)， 若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細(xì)胞有害。采用開放式培養(yǎng)時(shí)(碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng))，一般要把細(xì)胞置于 95%空氣加 5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中。磷酸緩沖劑中的 NaHCO3可供給 CO2，但 CO2易于逸出，故只適用于封閉式培養(yǎng)。若開放式培養(yǎng)還是 置于含有 5% CO2的氣體環(huán)境中為宜。為克服 NaHCO3調(diào)整的麻煩，也可用羥乙基哌嗪乙硫磺酸(Hepes)，它對細(xì)胞無毒性，也不起緩沖作用，主要作用是防止 pH 迅速變動，在開瓶通培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的 pH。
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