如何測(cè)量LOD，以及我們?nèi)绾螌?shí)現(xiàn)熒光素的皮摩爾檢測(cè)

確定檢測(cè)限

檢測(cè)限（LOD）定義為低濃度分析物的存在或不存在可以是使用給定的分析方法確定。樣本產(chǎn)生的信號(hào)（綠線）必須通過(guò)舒適的裕度（藍(lán)線），以便確信分析物

真正被檢測(cè)到。檢測(cè)限（LOD）通常為定義為信號(hào)的樣本濃度等于噪聲水平的3倍并且受到系統(tǒng)噪聲的限制。

測(cè)量熒光素

從5nM到5pM的一系列熒光素稀釋液使用0.1NaOH溶液制備，并在10mm內(nèi)測(cè)量路徑長(zhǎng)度石英比色杯。熒光測(cè)量結(jié)果.使用WP VIS光譜儀，50μm狹縫，使用450 nm.用于激勵(lì)的LED。我們自己的快速反應(yīng)杯支架已連接光譜儀的自由空間訪問(wèn)光譜儀的全f/2.0視野，最大限度地收集光線。熒光素對(duì)于低至5pM的樣品，在積分時(shí)間僅為50ms，平均值為50x。

噪聲的重要性

光譜儀測(cè)量中的噪聲可能包括熱噪聲.噪聲（暗噪聲，當(dāng)探測(cè)器未照明時(shí)），發(fā)射噪聲（計(jì)數(shù)噪聲，由光子的概率引起產(chǎn)生電流）、讀出噪聲（由于檢測(cè)器電路），以及固定模式噪聲（取決于二極管陣列）。雜散光也可能導(dǎo)致噪聲，并且應(yīng)該將其最小化。這個(gè)我們50個(gè)空白測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差（stddev）0.1 M NaOH參考值的波長(zhǎng)，并且發(fā)現(xiàn)非常低：4到7個(gè)計(jì)數(shù)。

通過(guò)設(shè)計(jì)最大限度地減少雜散光

雜散光是導(dǎo)致LOD降低的一個(gè)關(guān)鍵因素。那是為什么我們放置一個(gè)我們自己的匹配位于每個(gè)光柵中心的體相全息（VPH）光柵光譜儀，使用透射設(shè)計(jì)和像差校正光學(xué)器件，以保持光學(xué)器件中的每一個(gè)可能的光子路徑我們的VPH光柵提供高達(dá)40%的效率，具有更均勻的波長(zhǎng)和偏振響應(yīng)，以及與反射光柵相比具有超低散射，增強(qiáng)了我們穩(wěn)健、熱穩(wěn)定性設(shè)計(jì)的性能。

檢測(cè)和定量限度

作為濃度函數(shù)的信噪比為熒光素峰繪制，取信號(hào)（“樣本”-“空白”）與空白的在ln-ln尺度上繪制這一點(diǎn)揭示了高度線性擬合，指示高質(zhì)量數(shù)據(jù)。外推到SNR=3，即極限我們系統(tǒng)的檢測(cè)限（LOD）僅為2pM！

定量限（LOQ）定義了兩個(gè)可以說(shuō)樣品的濃度不同，需要SNR=10。我們的系統(tǒng)的LOQ被發(fā)現(xiàn)是6.6pM。

結(jié)論

LOD和LOQ是相當(dāng)簡(jiǎn)單的測(cè)量方法，可以實(shí)現(xiàn)緊湊型光譜儀的性能.以便直接與更靈敏的臺(tái)式系統(tǒng)進(jìn)行比較。實(shí)現(xiàn)約2pM LOD，WP可見(jiàn)光熒光.該系統(tǒng)證明其自身足夠靈敏，可以與昂貴的臺(tái)式熒光計(jì)的典型0.5pM LOD相媲美。它靈敏、緊湊、快速，是集成到生物醫(yī)學(xué)儀器或現(xiàn)場(chǎng)的理想工具。