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使用細(xì)胞爬片時(shí)的準(zhǔn)備及操作方法有哪些?

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2023年04月25日 16:12  

浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍(個人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細(xì)胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。高壓后取出放入烤箱中烤干,備用??靖珊罂煞湃氤瑑襞_中。

4.多聚賴氨酸的使用:

很多人都將玻片用此處理,以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時(shí)從來沒用過多聚賴氨酸,細(xì)胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。

 

細(xì)胞爬片的操作

1.胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中。

2.加細(xì)胞前,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。(整個過程注意無菌操作)

3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度接入培養(yǎng)板內(nèi)即可。

4.待細(xì)胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。

5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),作用一定時(shí)間后取玻片。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h,48h,72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話,將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

 

細(xì)胞爬片的固定

另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候,一般用培養(yǎng)皿或板,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。

細(xì)胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。當(dāng)然,有例外,比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗,因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過程中有可能會脫落。

然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標(biāo)記,為避免混淆,可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。

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