油紅O脂肪染色法是指在日常病理診斷和科研工作中為了顯示組織內(nèi)的脂肪常采用油紅O進(jìn)行染色的方法,油紅O為脂溶性染料,在脂肪內(nèi)能高度溶解,可特異性的使組織內(nèi)甘油三酯等中性脂肪著色。
在病理檢驗中,脂類染色法常用以證明脂肪變性,脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用廣泛的染料是蘇丹染料,常用的有蘇丹Ⅲ,蘇丹Ⅳ,蘇丹黑及油紅O等。蘇丹類的油紅O染料在脂類中的溶解度大于在有機(jī)溶劑的溶解度,所以染色時染料便從染液中轉(zhuǎn)移到被染的脂質(zhì)中去,使脂質(zhì)顯現(xiàn)出紅色。經(jīng)研究認(rèn)為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時,對蘇丹染料著色效果好。根據(jù)這一原理,適當(dāng)提高溫度(37℃-60℃)對組織切片染色效果是有好處的。
實(shí)驗流程:
1、 固定:將冰凍切片復(fù)溫干燥10min;細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定15min,PBS漂洗3次,5min/次。
2、 染色:入油紅O工作液孵育10-15min;細(xì)胞爬片破膜10-15min,PBS漂洗3次,5min/次,入油紅O工作液37°染色1-2h。
3、 分化:75%酒精分化2s,水洗1min。
4、 復(fù)染細(xì)胞核:Harris蘇木素復(fù)染1-2min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
5、 封片:用紙巾吸去周邊水分,甘油明膠封片。染色結(jié)果:脂滴呈橘紅色至鮮紅色,細(xì)胞核藍(lán)色。
實(shí)驗結(jié)果展示:
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