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HPLC使用操作和注意事項
HPLC流程簡圖：
流程
流程：如右圖所示，溶劑貯器（1）中的流動相被泵（2）吸入，經〔3〕梯度控制器按一寫的梯度進行混后然后輸出，經（4）測其壓力和流量，導入（5進樣閥（器）經（6）保護柱、（7）分離柱后到（8）檢測器檢測，由（10）數(shù)據處理設備處理數(shù)據或（11）記錄儀記錄色譜圖，（12）餾分收集器收集餾分，（13）為廢液。.
一． 操作步驟
1． 排空狀態(tài)：將吸液頭讓在已經超聲的甲醇中，旋松排空閥讓機器以高流速排走機器或輸液管的氣泡，3—5分鐘后關閉排空閥，排空結束。
2． 沖洗狀態(tài)：以適當流速沖洗機器核色譜柱大約20分鐘;同時開啟檢測器，讓檢測器處于預熱和自檢狀態(tài)。
3． 聯(lián)機狀態(tài)：打開聯(lián)機電腦讓色譜工作站和HPLC機器相連設定吸收波長，適當流速，查看系統(tǒng)壓力是否正常。
4． 用已經配好的流動相換下甲醇開始走基線，此過程大約20分鐘
5． 當基線平穩(wěn)，開始進樣準備。
6． 進樣前用進樣液清洗六通閥2-3次。
7． 樣品打入機器開始譜圖。
8． 譜圖完成清洗機器和關閉電腦：用甲醇做流動相以適當流速開始沖洗機器大約15分鐘，確定甲醇已經充滿機器管道。同時用甲醇清洗六通閥若干次。退出色譜工作站和關閉電腦。
9． 整理數(shù)據填寫結果。
二． 注意事項
1、進樣前樣品處理及注意事項
（1）須用平頭液相注射器進樣（禁用氣相尖頭進樣針）；
（2）進樣試液應無顆粒、渾濁和乳化，使用前先用超聲波溶解后，須用0.45um 的過濾膜過濾；
（3）部分裝取樣時，取樣體積一般小于定管的50%，*裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5 倍以上
（1）須用平頭液相注射器進樣（禁用氣相尖頭進樣針）；
（2）進樣試液應無顆粒、渾濁和乳化，使用前先用超聲波溶解后，須用0.45um 的過濾膜過濾；
（3）部分裝取樣時，取樣體積一般小于定管的50%，*裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5 倍以上
2、操作中注意事項：
1）． 流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2） 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3） 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
4） 壓力不能太大，不要超過150kgf/cm2 .
5） 因為緩沖試劑遇有機溶劑，會結晶，有損色譜柱，所以，每次由有機相變流動相或流動相變有機相均需用蒸餾水清洗。
6） 溫度是影響HPLC的壓力重要原因之一，所以盡量保持恒溫。
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