美國corning（康寧）細(xì)胞計(jì)數(shù)儀常見問題

康寧細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（貨號(hào)為6749）可計(jì)數(shù)的細(xì)胞大小和濃度范圍是多少?
可計(jì)數(shù)的細(xì)胞大小范圍為4～70 μm，細(xì)胞濃度范圍為5 x 104～1.0 x 107細(xì)胞/mL。

康寧細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能否對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分？
可以。通過細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)1:1混合，臺(tái)盼藍(lán)會(huì)將死細(xì)胞染成深藍(lán)色，而活細(xì)胞則不被臺(tái)盼藍(lán)染色。將混合液加入計(jì)數(shù)板中計(jì)數(shù)時(shí)，在軟件頁面選擇“trypanblue， yes (1:1)”, 計(jì)數(shù)儀會(huì)自動(dòng)分析死活細(xì)胞的數(shù)量及比例，并將結(jié)果直接展示在結(jié)果區(qū)，該結(jié)果無需再乘以2。

康寧細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能否對細(xì)胞團(tuán)簇進(jìn)行區(qū)分并準(zhǔn)確計(jì)數(shù)？
可以分析含有細(xì)胞簇的樣品。以下是對于293T細(xì)胞計(jì)數(shù)的測試圖片供您參考，兩圖中紅圈圈出部分是細(xì)胞團(tuán)簇，右圖中綠點(diǎn)代表檢測到的活細(xì)胞，紅點(diǎn)代表識(shí)別的死細(xì)胞。

計(jì)數(shù)時(shí)，視野中心細(xì)胞清晰，而邊緣細(xì)胞對焦不清晰，尤其是小于10um的細(xì)胞，是否會(huì)影響計(jì)數(shù)結(jié)果？
由于計(jì)數(shù)儀鏡頭是球形的，在對焦準(zhǔn)確時(shí)，即使邊緣的對焦不是很清晰，儀器仍然會(huì)對視野中計(jì)數(shù)范圍內(nèi)（4-70 μm）的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。若您對計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性有較高的要求，建議您拍攝多張圖片進(jìn)行計(jì)數(shù)，軟件可以將多張圖片中的結(jié)果整合取平均數(shù)，以提高計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

如何更好地對焦, 從而確保計(jì)數(shù)準(zhǔn)確？
為了準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)分析，需要確保對焦準(zhǔn)確。通過聚焦旋鈕多次順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，并且可以進(jìn)一步放大圖像觀察，能夠看到活細(xì)胞有明亮的中心和清晰的邊緣，如下圖所示，左側(cè)圖為未成功對焦，而右側(cè)圖中對焦準(zhǔn)確：


 

康寧細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能否對外周血單核細(xì)胞（PBMC）進(jìn)行計(jì)數(shù)？
可以。PBMC細(xì)胞大小約7-8 μm，符合康寧細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)范圍。在對PBMC計(jì)數(shù)時(shí)，需要注意避免碎片等非細(xì)胞雜質(zhì)被識(shí)別成死細(xì)胞從而影響結(jié)果，因此準(zhǔn)確對焦非常重要。死細(xì)胞在對準(zhǔn)焦后呈現(xiàn)出實(shí)心黑點(diǎn)的樣子，如下圖所示，盡可能避免對焦后有光環(huán)或模糊狀的存在。