超微量紫外/熒光全功能分光光度計在RNA質控的應用

RNA質控，我來幫你！
 
小編心里話：RNA質控是個技術活兒！
 
對于每天泡在實驗室的人來說，qPCR已是家常便飯。毫無疑問濃度高，純度好，片段完整，才是我們理想中的RNA樣品。然而，RNA總是嬌氣的存在！室溫或4度極易降解，提取的時候容易有污染物殘留。因此完整的RNA質控包含了三個方面：濃度質控，純度質控，片段完整性質控。
 
如何把控RNA質量，繼續(xù)反轉錄呢？
 
有一款RNA質控的高手，既可以提供RNA濃度質控，也可以提供RNA純度質控，沒錯，就是美國Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/熒光全功能分光光度計，看上去酷酷的RNA純度質控的標準方法是超微量分光光度計（光吸收）法，通過監(jiān)控A260/230和A260/280的比值來判定RNA的純度。通常A260/280的比值范圍在1.8-2.0之間，如果大于2.0則說明RNA已經(jīng)降解，如果低于1.8則說明含有蛋白質或其他雜質；而A260/230的比值如果小于2，則表明RNA中含有酚類，鹽等雜質。DS-11FX的微量光度計功能可以幫助科研人員來準確的判定RNA樣品的純度。
 
下圖為RNA紫外法檢測示意圖，A260/280和A260/230都不在正常的比值范圍，說明RNA樣品純度很差，儀器會自動進行提示，兩個黃色小三角就是警示圖標哦，點擊萌萌的黃色三角警示，儀器會顯示污染物的種類，夠智能吧，這就是DS-11的SmartQC功能

圖1 總RNA的測量界面圖（美國DeNovix，DS-11FX）
 
RNA濃度質控的標準方法是熒光法，除非是純度很高的RNA也可以采用紫外法。熒光法采用RNA特異性染料，可以準確的測量RNA濃度。DS-11FX不但提供RNA濃度質控，也可以提供DNA和蛋白的濃度精確控制，功能超級強大哦。
 
dsDNA，RNA，ssDNA，Protein單獨的熒光檢測app
 
發(fā)表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress，作者提取衛(wèi)星細胞的總RNA，采用DS-11FX超微量/熒光全功能分光光度計進行RT-PCR之前的RNA的質量把控和濃度鑒定。