熒光分光光度計(jì)（熒光分析儀）

一、熒光分析法的基本原理    
    處于基態(tài)的被測物質(zhì)的分子在吸收適當(dāng)能量，如光、化學(xué)、物理能后，其共價電子從成鍵分子軌道或非鍵分子軌道躍遷到反鍵分子軌道上去，形成分子激發(fā)態(tài)。分子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，將很快衰變到基態(tài)。在分子激發(fā)態(tài)返回到基態(tài)的同時常伴隨著光子的輻射。這種現(xiàn)象就是發(fā)光現(xiàn)象。熒光則屬于分子的光致發(fā)光現(xiàn)象。

二、熒光分光光度計(jì)的特點(diǎn)
   用熒光分析法分析的儀器，稱熒光分光光度計(jì)（熒光分析儀）。
    熒光分析法具有靈敏度高（比紫外、可見分光光度法高2~3個數(shù)量級），能提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、發(fā)射強(qiáng)度、特征峰值等信息，在生物、環(huán)保、醫(yī)學(xué)、藥物、石油勘探等諸多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。本儀器不僅能直接、間接地分析眾多的有機(jī)化合物；另外，還可利用有機(jī)試劑間的反應(yīng)，進(jìn)行近70種無機(jī)元素的熒光分析。熒光的光譜特征是熒光光譜總是滯后于激發(fā)光譜即斯托克斯位移.

三、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系
1．對于某種熒光物質(zhì)的稀溶液，在一定強(qiáng)度的激發(fā)光照射下，熒光物質(zhì)的發(fā)射強(qiáng)度與入射光的強(qiáng)度以及檢測器的放大倍數(shù)成正比，可以用以下公式表示：
          F=KIFC
          K-----與儀器系統(tǒng)有關(guān)的常數(shù)
          I-----入射光的強(qiáng)度
          F-----熒光物質(zhì)的熒光效率
          C-----熒光物質(zhì)的濃度
2．當(dāng)樣品濃度增大到一定值時，熒光強(qiáng)度與濃度就不成線性關(guān)系。
    原因一：樣品濃度較高時，液池前部的溶液強(qiáng)吸收則發(fā)生強(qiáng)的熒光，液池后半部的溶液不易受到入射光照，不發(fā)生熒光，所以熒光強(qiáng)度反而降低。
    原因二：在濃度較高的溶液中，可能發(fā)生溶液溶質(zhì)與溶質(zhì)間的相互作用，形成一種不致熒光的復(fù)合物，從而造成熒光強(qiáng)度反而降低的現(xiàn)象。