熒光定量PCR檢測方法和應(yīng)用環(huán)境

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative PCR, qPCR）通過對PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)監(jiān)測，實(shí)現(xiàn)對起始模板的定性及定量分析。目前主要通過熒光染料或者熒光標(biāo)記的探針對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，并結(jié)合相應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測法在生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)上都有著廣泛的應(yīng)用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測法的應(yīng)用場景和范圍

DNA或RNA的絕對定量分析

包括病原微生物或病毒含量的檢測，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物拷貝數(shù)的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。

基因表達(dá)差異分析

例如比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 (如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及 cDNA 或差顯結(jié)果的確證?；蚍中?。例如 SNP 檢測，甲基化檢測等。

病原體定量測定

目前，采用熒光定量 PCR 檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、細(xì)小病毒 B19、EB 病毒和人巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。

藥物研發(fā)和療效研究

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確、定量、靈敏地測定血液或組織中病原體的含量，因此有利用分析藥物的作用效果，為比較不同的配方的療效、用藥量、用藥時(shí)間等等提供快速、定量的評價(jià)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測法的應(yīng)用場景和范圍

DNA或RNA的絕對定量分析

包括病原微生物或病毒含量的檢測，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物拷貝數(shù)的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。

基因表達(dá)差異分析

例如比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 (如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及 cDNA 或差顯結(jié)果的確證。基因分型。例如 SNP 檢測，甲基化檢測等。

病原體定量測定

目前，采用熒光定量 PCR 檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、細(xì)小病毒 B19、EB 病毒和人巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。

藥物研發(fā)和療效研究

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確、定量、靈敏地測定血液或組織中病原體的含量，因此有利用分析藥物的作用效果，為比較不同的配方的療效、用藥量、用藥時(shí)間等等提供快速、定量的評價(jià)。