離心管作用細胞復蘇轉(zhuǎn)移

細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。

實驗材料：

離心管、細胞培養(yǎng)瓶、移液管

實驗步驟：

●打開水浴鍋加熱至37℃。

● 超凈臺上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的），細胞培養(yǎng)瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風5至10分鐘除去臭氧。

● 37℃預熱好要復蘇細胞的培養(yǎng)液，也可以不用預熱培養(yǎng)液，根據(jù)細胞情況選擇。

●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中，800-1000rpm下離心5min，棄上清，加適量培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細胞后轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)瓶中，輕晃使瓶底液體分散均勻，標好細胞名稱、代數(shù)、復蘇日期，顯微鏡下觀察后放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中。一般貼壁細胞過夜即可貼壁，換液和傳代時間根據(jù)不同細胞生長情況而定。

實驗注意事項：

復蘇時動作要快，盡量減少胞內(nèi)形成冰晶，影響復蘇后細胞活率。

1. 融化時盡量不要碰到管口，以免容易造成污染。

2.若一次性需要復蘇細胞很多，可以分批水浴解凍，防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。

3.若需要同時復蘇好幾種細胞，提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標記，或記住自己擺放的位置，不要弄混亂。