【環(huán)凱原創(chuàng)】有趣的細菌拉絲試驗 — 快速區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌

是否有想知道平板上的分離菌的到底是革蘭氏陰性還是陽性菌，卻因沒有革蘭氏染色或沒有顯微鏡或不會革蘭氏染色操作而不知所措？或者，革蘭氏染色后還不確定標(biāo)本測試菌是革蘭氏陰性還是陽性菌的？

下面給大家介紹個簡單又有趣的解決方法 —— 細菌拉絲試驗，不需染色劑不需顯微鏡，一分鐘輕松區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌。

此法在1970年Smith^【1】首先報道應(yīng)用去氧膽酸鈉溶液做拉絲試驗區(qū)分弧菌與非弧菌（如氣單胞菌屬細菌），初步鑒別霍亂弧菌；1981年Shushan等^【2】和1983年Agbonlahor等^【3】相繼應(yīng)用氫氧化鉀溶液做拉絲試驗區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌。

目前國內(nèi)細菌拉絲試驗主要也是應(yīng)用于兩個方面：一是用于霍亂弧菌初步鑒別^【4】，二是用于區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌^【5-8】。

區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌的拉絲試驗方法^【6】：取一張洗凈玻片， 滴加25g/L氫氧化鉀水溶液一滴，根據(jù)菌落大小，從平板上挑取單個菌落或數(shù)個純培養(yǎng)菌落，置于氫氧化鉀滴液中研磨，經(jīng)15-60秒， 自混懸液中輕輕提起接種環(huán)，仔細觀察；60秒內(nèi)混懸物中形成黏液狀并可拉成細絲（5mm以上）為陽性（對應(yīng)是革蘭氏陰性菌），60秒混懸物均勻不出現(xiàn)細絲者為陰性（對應(yīng)是革蘭氏陽性菌）。

目前有兩種說法，第一種說法是革蘭氏陰性菌的細胞壁在稀堿氫氧化鉀溶液中容易裂解，裂解后釋放出DNA，使氫氧化鉀溶液變?yōu)檎吵聿⑿纬烧辰z，反之，稀氫氧化鉀對此革蘭氏陽性菌無此作用^【5】；第二種說法是與細胞壁化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，在氫氧化鉀作用下革蘭氏陰性菌的細胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂質(zhì)被皂化而形成粘稠物，致拉絲試驗陽性，而革蘭氏陽性菌細胞壁主要成分是粘肽，氫氧化鉀不能使其形成粘稠物，故拉絲試驗陰性。革蘭氏陰性經(jīng)過氫氧化鉀溶液處理后再革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)菌體細胞壁溶解，呈模糊絮片狀，細胞壁有不同程度的損傷，接種適宜培養(yǎng)基上不能生長繁殖，而革蘭氏陽性菌無此現(xiàn)象^【6-7】。

其實，這兩種說法都是認為與革蘭氏陽性和陰性菌細胞壁結(jié)構(gòu)成分有關(guān)，所以此法可用于區(qū)分革蘭氏陽性和陰性菌。但至于粘稠的物質(zhì)是DNA還是革蘭氏陰性菌細胞壁類脂物質(zhì)被氫氧化鉀皂化形成的，要闡明還有待進一步的研究。

拉絲試驗區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌的準(zhǔn)確性：相關(guān)研究報道表明^【6-8】，氫氧化鉀拉絲試驗結(jié)果與革蘭氏染色一致，二者符合率為100%。拉絲試驗不但能正確區(qū)別革蘭氏陰性菌和陽性菌，還有助于復(fù)核革蘭氏染色結(jié)果的正確性，也是革蘭氏染色質(zhì)控的有力措施。

但拉絲試驗結(jié)果也會受到試劑、菌量、菌型等因素影響^【6】，所以為了保證該試驗結(jié)果的準(zhǔn)確，操作時需注意：