染色步驟丨Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒

Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒Calcein, AM 是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成 Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。

與其它同類試劑（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein, AM 的細(xì)胞毒性很低。Calcein 的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為 490 nm 和 515 nm。Calcein, AM 僅對(duì)活細(xì)胞染色。

作為核染色染料的 PI 不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的 DNA 雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（激發(fā)：535nm，發(fā)射：617 nm），因此 PI 僅對(duì)死細(xì)胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用 545 nm 激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。由于不同細(xì)胞系的最佳染色條件不同，我們建議個(gè)別確定 Calcein, AM 和 PI的合適濃度。

艾美捷 Biogradetech Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒：

中文名稱：Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒

英文名字：Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit

Biogradetech貨號(hào)：B-CHK103-500T

規(guī)格：500T

保存建議：Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒保存：-20℃干燥避光 有效期一年。

圖1.Calcein-AM/PI細(xì)胞雙染試劑盒染色案例（左圖：Calcein-AM染FTC細(xì)胞（活細(xì)胞單染）中圖：PI染HCT116細(xì)胞（死細(xì)胞單染）右圖：Calcein-AM、PI染MHD-1 細(xì)胞（活死細(xì)胞雙染））

Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒染色步驟：

1、 用Trypsin-EDTA消化細(xì)胞。

2、 通過離心收集細(xì)胞（1,000 rpm，3 min）。

3、 去除上清液，加入PBS（-）制備細(xì)胞懸液（105 - 106 cells/ml為宜）。

4、 重復(fù)步驟2和步驟3數(shù)次以消除培養(yǎng)基中的酯酶活性。

5、 取100 μl 染色工作液與200 μl 細(xì)胞懸液混合，在37℃培養(yǎng)15 min。

6、 在490±10 nm激發(fā)波長(zhǎng)下同時(shí)觀察黃綠色熒光的活細(xì)胞和紅色熒光的死細(xì)胞。另外用545 nm激發(fā)波長(zhǎng)單獨(dú)觀察死細(xì)胞。