乳酸含量（LA）檢測試劑盒（可見分光光度法）使用說明書

乳酸含量（LA）檢測試劑盒（可見分光光度法）

產品貨號：BA1258

產品規(guī)格：50管/24樣

產品簡介：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，H⁺傳遞給PMS生成的PMSH₂還原MTT生成紫色物質，在570nm處有特征吸收峰。

技術指標：

最di檢出限：0.0387μmol/mL

線性范圍：0.039-1μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

產品組成：

溶液的配制：

1. 試劑二：液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前按試劑二（V）：蒸餾水（V）=10μL：450μL的比例配制試劑二溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

2. 試劑三：臨用前加入12mL蒸餾水充分溶解，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融，-20℃保存一周；

3. 試劑四：臨用前加12mL蒸餾水充分溶解，4℃保存一周；

4. 試劑五：臨用前每瓶加入8mL蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融，-20℃保存一周；

5. 標準品：臨用前加入1.04mL蒸餾水配成100μmol/mL的標準溶液；

6. 顯色液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑三（V）：試劑四（V）=1：1的比例充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。

需自備的儀器和用品： 

天平、研缽/勻漿器、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、乙醇和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按照質量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃12000g離心10min后取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃12000g離心10min后取上清待測。

3. 血清（漿）：取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g離心10min后取上清待測。

二、測定步驟 

1. 分光光度計預熱30min以上，波長調至570nm，乙醇調零。

2. 標準液的稀釋：將100μmol/mL的標準溶液用蒸餾水稀釋為1、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039μmol/mL的標準溶液待測。

3. 加樣表：

三、乳酸含量的計算

1. 標準曲線的繪制

以各標準溶液濃度為x軸，以其對應的吸光值（ΔA標準）為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入公式中得到x（μmol/mL）。

2. 乳酸含量計算

（1）按照蛋白含量計算

LA含量（μmol/mg prot）=x×V樣本÷（V樣本×Cpr）=x÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

LA含量（μmol/g質量）=x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W

（3）按照細胞數(shù)量計算

LA含量（μmol/10⁶ cell）=x×（V上清+V提取液二）÷（5×V上清÷V提取液一）=0.2375×x

（4）按照液體體積計算

LA含量（μmol/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷ [V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]=13.0625×x

V樣本：加入的樣本體積，0.05mL；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測 定；V上清：提取時上清液體積，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二體積，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一體積，1mL；5：細胞數(shù)量，5×10⁶個；V液體：液體樣本體積，0.1mL。

注意事項:

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。