如何利用PEI轉(zhuǎn)染細(xì)胞呢？

轉(zhuǎn)染細(xì)胞的方法有很多，這里介紹一種比較經(jīng)濟實用的轉(zhuǎn)染試劑--聚乙烯亞胺(即PEI)。PEI（polyethylenimine）是一種帶有高電荷陽離子的多聚物，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的DNA分子，形成復(fù)合物，并轉(zhuǎn)染到貼壁和懸浮細(xì)胞中，常用于大規(guī)模瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)。在HEK293和CHO等細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率較高。那么如何利用PEI轉(zhuǎn)染細(xì)胞呢？

實驗前準(zhǔn)備：

PEI (polysciences, Cat#:24765-1),將PEI配置成1ug/ml，用0.2μm濾膜過濾，并分裝儲存于負(fù)80度。

實驗步驟（以轉(zhuǎn)染293T為例）：

1.在六孔板中鋪10萬個細(xì)胞，在二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育過夜。

2.在100ul DMEM中加入2ug目的質(zhì)粒。如果是10cm皿可以加入5ug質(zhì)粒。

3.加入10ul PEI，立即混勻。室溫孵育10min。

4.然后再補加600ul DMEM培養(yǎng)基。

5.吸掉六孔板中的培養(yǎng)基，然后將700ul混合液慢慢加入到細(xì)胞中，輕輕搖晃混勻。

6.在二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育3小時，然后加入2ml wan全培養(yǎng)基（DMEM+10%FBS）。

7.培養(yǎng)箱中孵育48小時，進(jìn)行下一步實驗。

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下期內(nèi)容：怎么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢？