磁珠法24孔質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒

HA31016 磁珠法24孔質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒（90-96mL）

可應(yīng)用于對(duì)小量菌液進(jìn)行質(zhì)粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩沖液系統(tǒng)。磁珠在一定條件下對(duì)質(zhì)粒DNA具有極(空格)強(qiáng)的親和力，當(dāng)條件改變時(shí)可以可逆的釋放質(zhì)粒DNA，從而達(dá)到分離純化質(zhì)粒DNA的效果。整個(gè)操作過程簡(jiǎn)便、快速。本產(chǎn)品可最大限度的去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證提取所得質(zhì)粒DNA的純度，所得質(zhì)粒DNA產(chǎn)物可直接應(yīng)用于酶切、測(cè)序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒可在EP管中進(jìn)行手動(dòng)法操作，或者與自動(dòng)化核酸提取儀配合使用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量操作。

【試劑盒組成】

【貯存條件】

組分①-⑥于2～8℃保存；組分⑦于-20℃保存；其他組分室溫保存；

【實(shí)驗(yàn)步驟】

一、試劑準(zhǔn)備

1. 將組分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入組分①P1 buffer中，混勻，放置4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

2. 在組分⑤Binding buffer中加入9.75mL無水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆茫?/p>

3. 在組分⑥Wash buffer中加入40mL無水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

二、操作步驟

1.  樣品準(zhǔn)備

a) 在24深孔板里過夜培養(yǎng)的4mL菌液，在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000rpm離心15min，盡棄上清。

注意：孔之間不要污染。

b) 將300μL P1 Buffer加入24深孔板離心過后的菌體中，將24深孔板放置實(shí)驗(yàn)桌上，貼著桌面左右晃動(dòng)，菌體充分懸浮。

注意：使用前請(qǐng)?zhí)砑覴Nase 到P1 Buffer和在懸浮菌體時(shí)液體不要濺出杜絕污染。

c)  加300μL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，左右緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），進(jìn)行裂解。

注意：操作時(shí)間不能超過5min（防止基因組污染）。

d) 再向裂解體系中加入420μL P3 Buffer，左右緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），出現(xiàn)絮狀物沉淀。

e) 將裂解后的24深孔板放置在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000rpm離心20min。

f) 取出離心后的24深孔板，一一對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移840uL上清至24 深孔板中。

注意：在轉(zhuǎn)移過程中杜絕出現(xiàn)污染，樣品并做好標(biāo)記。

2. 質(zhì)粒抽提

a) 準(zhǔn)備清洗24孔深孔板，添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。

b) 準(zhǔn)備洗脫24孔深孔板，添加100uL的無菌水至新的24孔深孔板。

c) 添加200uL磁珠混懸液至上述24深孔板中，完成后再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。

注意：添加磁珠前混勻磁珠混懸液。

d) 放置24孔磁力套至1號(hào)板位的24孔深孔板上，2號(hào)板位放置含有樣品和磁珠24孔深孔板，3號(hào)和4號(hào)板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板，5號(hào)板位放置100uL的超純水的24孔深孔板。

e) 運(yùn)行質(zhì)粒抽提儀器，進(jìn)入質(zhì)粒抽提專用程序，運(yùn)行完成后用移液器將樣品轉(zhuǎn)移至全裙邊的96PCR板里，轉(zhuǎn)移完成后標(biāo)記項(xiàng)目號(hào)和質(zhì)粒信息。

f) 使用分光光度計(jì)檢測(cè)A260，并進(jìn)行定量，測(cè)定的濃度記錄于96PCR板上并登記excel表。

【注意事項(xiàng)】

1.  試劑時(shí)間長(zhǎng)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.  磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3.  Buffer P1加入后一定要充分懸浮細(xì)菌，要保證看不到結(jié)塊的菌，否則細(xì)菌不易被裂解，質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)顯著下降。

4.  Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水?。?7℃）加熱溶解，混勻后使用。

5.  基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。