上海研域生物講解ELISA試劑盒構(gòu)成及檢測原理

以雙抗體夾心法為例，上海研域生物對ELISA試劑盒簡要操作步驟如下：

　　包被抗體包被到酶標(biāo)板

　　加樣本/標(biāo)準(zhǔn)品

　　加生物s標(biāo)記的檢測抗體

　　加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素

　　加顯色底物TMB

　　加終止液

　　ELISA 試劑盒組分

　　酶標(biāo)板(Microplate)

　　酶標(biāo)板，在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)中作為載體的酶標(biāo)板對抗原抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用。

　　標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)

　　標(biāo)準(zhǔn)品即為已知濃度的目標(biāo)物(樣本中待測因子)的純蛋白，對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　生物s標(biāo)記的檢測抗體(Detected Antibody)

　　檢測抗體即為與目標(biāo)物特異性結(jié)合的抗原/抗體鑒于酶標(biāo)二抗的局限性，現(xiàn)在廠家一般引入生物s親和素系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)。

　　洗滌液(Washing Buffer)

　　長時間的孵育后，會出現(xiàn)非特異性結(jié)合，這時就需要洗滌液來洗去非特異性結(jié)合的蛋白或抗體。常用的洗滌液有:磷酸鹽緩沖液(PBS)、平衡鹽緩沖液(BBS)等。

　　辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)

　　鏈霉親和素是Streptomyces avidinii(阿維丁鏈霉菌)的分泌物。鏈霉親和素分子由4條相同的膚鏈組成，非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低。在ELISA試劑盒中，用于與檢測抗體上的生物s相結(jié)合。

　　TMB在過氧化氫存在的情況下可被HRP或其他過氧化物酶催化生成可溶的藍(lán)色物一價物。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色一價物轉(zhuǎn)為黃色二價物，此時可在450nm 測定吸光度

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