《中國(guó)藥典》2020年版第一增補(bǔ)本 “2351真菌毒素測(cè)定法”變動(dòng)部分梳理及應(yīng)對(duì)方案

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2023年10月18日，國(guó)家藥典委員會(huì)發(fā)布公告，《中國(guó)藥典》2020年版第一增補(bǔ)本已編制完成，將于明年3月12日正式實(shí)施。島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)緊跟法規(guī)變化，梳理相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)變動(dòng)部分，并為廣大客戶提供應(yīng)對(duì)方案。

“2351真菌毒素測(cè)定法”變動(dòng)部分梳理

一、黃曲霉毒素測(cè)定法：第一法（液相色譜法）

1、混合對(duì)照品溶液的制備

精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用“70%（訂正）”甲醇稀釋至刻度，即得。

對(duì)照品溶液制備時(shí)定容溶劑為純甲醇，洗脫能力大于分離條件洗脫能力，在某些基質(zhì)中峰形可能較差，修改為70%甲醇后，洗脫能力與分離條件洗脫能力接近，改善某些基質(zhì)中峰形。

2、供試品溶液的制備

再用“1.5mL（訂正）”甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，加“水（訂正）”稀釋至刻度。

明確了甲醇洗脫液的體積，洗脫體積不夠，抗體中結(jié)合的黃曲霉毒素不能完全被洗脫掉，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)偏差較大。

三、玉米赤霉烯酮測(cè)定法：第一法（液相色譜法）

1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)λex=232nm“（或274nm）訂正”，發(fā)射波長(zhǎng)λem=460nm。

在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施階段，我們發(fā)現(xiàn)在不同品牌熒光檢測(cè)器上，不同激發(fā)波長(zhǎng)的基線噪音有差異，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)。

六、多種真菌毒素測(cè)定法

1、以三重四極桿質(zhì)譜儀檢測(cè)

電噴霧離子源（ESI），黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1、伏馬毒素B1、B2及T-2毒素“及嘔吐毒素”為正離子采集模式，赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮為負(fù)離子采集模式（修訂）。

“嘔吐毒素檢出限35μg/kg，定量限100μg/kg”（訂正）。

“赭曲霉毒素A檢出限1μg/kg，定量限2μg/kg”（訂正）。

注：以上順序?yàn)榉椒ㄔ牡捻樞颉?/span>

玉米赤霉烯酮應(yīng)用方案

儀器配置：島津高效液相色譜儀RF-20A

色譜柱：ShimNex CS C18，250mm×4.6mm，5μm (P/N：380-01230-01)

流速：1.0 mL/min；

進(jìn)樣量：5 μL-50 μL；

柱溫：30℃；

流動(dòng)相：乙腈-水=50：50

檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器；激發(fā)波長(zhǎng)274nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（進(jìn)樣量：5 μL）

儀器配置：島津高效液相色譜儀RF-20Axs

色 譜 柱    ：Shim-pack GIST C18 ，4.6 mm I.D.×250 mm L.，5.0 μm， PN：227-30017-08

流 動(dòng) 相    ：乙腈-水（50：50）

流    速    ：1.0 mL/min

柱    溫    ：30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)    ：激發(fā)波長(zhǎng)232 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（進(jìn)樣量：5 μL）

從兩張色譜圖結(jié)果可以看到，使用激發(fā)波長(zhǎng)274nm條件下，基線噪音良好，響應(yīng)滿足檢測(cè)技術(shù)指標(biāo)要求。

多種真菌毒素測(cè)定法應(yīng)用案例

10種真菌毒素薏苡仁基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM圖譜

薏苡仁樣品檢測(cè)結(jié)果

對(duì)“薏苡仁”樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)四種真菌毒素有檢出，分別是DON（嘔吐毒素）、FB1（伏馬毒素B1）、FB2（伏馬毒素B2）、ZON（玉米赤霉烯酮）。其中“薏苡仁”在藥典正文規(guī)定中需要檢測(cè)黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮，樣品檢測(cè)結(jié)果滿足藥典要求。

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