冰凍切片包埋劑的制備方法及注意事項

制備步驟:

將組織在恒溫冷凍機里面切片。

冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺上。

冷凍切片機應(yīng)長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。

1、當(dāng)冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。

2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機上。

3、粗切，修出切面細切幾張，用毛筆刷去刀上組織片。

4、放下抗卷板，開始切片，切片速度一般為5-6微米，切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定，固定時間為10-20秒。

注意事項:

1、速凍是冰凍切片的關(guān)鍵，因為只有速凍才能減少組織內(nèi)的冰晶，辦法就是將速凍頭迅速壓在組織上，切好后就可以凍片，特別適用于較脆的組織。

2、固定切片后應(yīng)立即放入甲醇冰醋/酸中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成細胞退變。固定液有很多種，甲醇作用快、收縮小、染色較清晰，是冰凍切片固定液，而每97ml加入冰酸醋3ml，會減少某些膠質(zhì)、鈣質(zhì)較多的組織不容易掉片。

3、包埋劑可用普通膠水代替，但要加入適量的水(膠水與水的比例大約在2:1)。

太稀了容易損傷切片刀，太稠了黏在刀上不容易洗掉，影響切片的質(zhì)量。

4、冰凍用切片刀不僅要磨得快，而且要磨得直，否則切出來的片子就會不平整，不能進入抗卷板(最好使用一次性刀片)。

5、如組織發(fā)脆，可以等幾分鐘后再切，也可用手在組織上稍微加溫;如果用手去摸組織塊，最好戴手套，或用玻片間的紙夾在手與組織之間，以防感染。

6、冷凍室的室溫冬天一般設(shè)置在-19℃左右，夏天設(shè)置在-22℃左右。

不同的組織有不同的溫度要求，如肝臟、甲狀腺組織溫度應(yīng)設(shè)置在-15℃左右，脂肪組織一般設(shè)置在-35℃以下。

7、冷凍切片機應(yīng)長期處于恒溫冷凍狀態(tài)，經(jīng)常的開關(guān)電源容易造成設(shè)備損壞。