嘉適GBICI 脂質體lipofectamine 2000 轉染操作

在做轉染，效果很好，用的也是LIPOFECTAMINE 2000，每次都是一次成功的。有以下幾個建議：

1.細胞的狀態(tài)。這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于*的生長狀態(tài)再做。個人覺得細胞復蘇后的3代左右細胞狀態(tài)，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化了。

2.細胞的融合度。說明書上寫的細胞的融合度要達到90%才能做啊，你的才70%，細胞太少，肯定容易死的。我的接種密度是3~4*105/ml.

3.無血清培養(yǎng)基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有無血清培養(yǎng)基的話，就用它代替PBS洗細胞兩遍。注意洗的時候要輕，靠邊緣加入液體，然后不要吹吸細胞，而是轉動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，當然加了脂質體，細胞受影響就更大了。

4.加入無血清培養(yǎng)基后5~6小時更換全培養(yǎng)基。18小時毒性時間太長了！

5.轉染的質粒一定純度好、濃度高、無內(nèi)毒素。濃度不要低于0.35ug/ul。

用的是invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000，以下是以6孔板為例說明一下我的體系吧！

溶液1：240ul 無血清培養(yǎng)基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （總體積250 ul）（溫育5min）
溶液2：X ul 無血清培養(yǎng)基 + 4 ug 質粒 per well（總體積250 ul）

將溶液1與溶液2混合，室溫下置20min。

無血清培養(yǎng)基沖洗細胞兩遍后加入2ml 無血清培養(yǎng)基。

將溶液1與溶液2的混合液逐滴加入孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。在37℃，5％的CO2中保溫24-72小時。

個人經(jīng)驗：48小時mRNA表達zui高；72h蛋白表達zui高。