發(fā)酵罐空消實(shí)消操作要點(diǎn)
發(fā)酵罐滅菌分為空消和實(shí)消兩部分:
空消:不論是種子罐還是發(fā)酵罐,當(dāng)培養(yǎng)基(或物料)還未進(jìn)罐前對(duì)罐進(jìn)行預(yù)先滅菌,稱為空罐滅菌,也稱空消。目的是殺死全部微生物尤其是耐熱芽孢,空罐滅菌要求溫度較高,滅菌時(shí)間較長(zhǎng),確保殺死設(shè)備中各死角殘余雜菌或芽孢
實(shí)消:實(shí)罐滅菌是將培養(yǎng)基置于發(fā)酵罐中用蒸汽加熱,到達(dá)預(yù)定滅菌溫度后,維持一定時(shí)間,再冷卻到發(fā)酵溫度,然后接種發(fā)酵,也稱實(shí)消或分批滅菌。操作關(guān)鍵點(diǎn)為三路進(jìn)汽,三路進(jìn)汽即蒸汽從通風(fēng)、取樣和出料口進(jìn)入罐內(nèi)直接加熱,直到所要求溫度,并維持一定時(shí)間
一:影響滅菌的因素:
①pH值。pH值對(duì)微生物耐熱性影響很大,pH為6.0~8.0時(shí)微生物最不易死亡,pH <6.0時(shí)氫離子易滲透微生物細(xì)胞內(nèi);
②培養(yǎng)基的顆粒物大小。當(dāng)培養(yǎng)基中存在較大顆粒物質(zhì)特別是凝結(jié)成團(tuán)的膠體時(shí),滅菌效果會(huì)受到影響;
③培養(yǎng)基成分。油脂、糖類、蛋白質(zhì)都是傳熱不良介質(zhì),會(huì)增加微生物耐熱性,使滅菌困難。濃度較高培養(yǎng)基相對(duì)需要較高溫度和較長(zhǎng)時(shí)間滅菌。高濃度鹽類,色素則減弱微生物耐熱性,故較易滅菌。
二:具體滅菌步驟如下:
(1)打開夾套蒸汽閥,利用蒸汽使罐體溫度上升至75℃~80℃,打開冷凝水排水閥,排凈冷凝水。打開取樣口,使少量蒸汽排出。
(2)待罐內(nèi)溫度上升至80℃~90℃,將空氣過濾器下的冷凝水閥門打開,然后開啟空氣管道蒸汽閥,排凈冷凝水,排水2~3分鐘左右,然后將冷凝水閥門關(guān)小,確保有微量冷凝水緩緩流出。
(3)升溫時(shí),排氣閥門保持開啟,且罐內(nèi)壓力不低于0.1Mpa,查看各個(gè)管道蒸汽是否通暢,管道內(nèi)部要保持一定的壓力,避免出現(xiàn)滅菌死角。
(4)溫度達(dá)到121℃時(shí),略微開啟接種口,使少量蒸汽排出即可。應(yīng)經(jīng)常調(diào)節(jié)排氣閥和進(jìn)氣閥,使罐內(nèi)壓力維持在0.1Mpa左右,持續(xù)20分鐘。
(5)等待滅菌結(jié)束,關(guān)閉接種口、補(bǔ)料口、接種排氣閥、夾套蒸汽閥、最后關(guān)閉進(jìn)氣口下的蒸汽閥(快速關(guān)閉,注意管道內(nèi)的壓力),再緩緩開啟進(jìn)空氣閥,引進(jìn)無菌空氣,開啟空氣過濾器下方的冷凝水閥,使空氣過濾器降溫,待空氣過濾器冷卻完畢,再關(guān)閉此閥門。期間保持罐內(nèi)壓力在0.02Mpa以上。
(6)待溫度降至100℃以下,關(guān)閉排污閥、開啟冷水閥或自來水閥、開啟回水閥。使用控制面板,設(shè)置自動(dòng)調(diào)節(jié)溫度37℃。待溫度降至40℃時(shí),停罐。
三:滅罐注意事項(xiàng):
滅菌過程中要堅(jiān)持下進(jìn)(進(jìn)蒸汽),上出(排氣)的原則。調(diào)整閥門蒸汽大小,按大閥門開小、小閥門開大的原則,從各路進(jìn)蒸汽管道進(jìn)蒸汽給料液升溫。升溫時(shí)排氣閥應(yīng)開啟,保持流通,避免罐內(nèi)出現(xiàn)假壓力。夾套不能進(jìn)冷卻水,滅菌過程中要保持夾套排氣管路不能有冷卻水;滅菌恒溫過程中接種口和移種管路排氣;恒溫過程中液面要翻騰,防止假壓力。
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