bigelow培養(yǎng)方法介紹

培養(yǎng)基類型

富集培養(yǎng)基和人工培養(yǎng)基是培養(yǎng)基的兩種主要類型。富集培養(yǎng)基通常通過以下兩種方式制備：(1) 通過將土壤或土壤提取物添加到蒸餾水或天然水中，或 (2) 通過將營養(yǎng)化學(xué)品添加到天然水（例如海水或湖水）中。人工介質(zhì)僅使用“純”水和“純”化學(xué)品；它不包括添加未定義的土壤或天然湖泊或海水。然而，認識到即使是精心制備的人工培養(yǎng)基中也存在未知的“雜質(zhì)”，這一點非常重要。

富含土壤和水的介質(zhì)適合維持藻類培養(yǎng)。良好的土壤提供無機和有機物質(zhì)——藻類生長良好，并且培養(yǎng)引起的形態(tài)變化是有限的。

通過化學(xué)濃縮海水制備的海洋介質(zhì)很常見。然而，使用湖水或河水進行化學(xué)富集的淡水培養(yǎng)并不常見。相反，人工培養(yǎng)基對于許多淡水藻類的生長來說很常見并且非常成功，但僅當無法使用天然海水基礎(chǔ)進行關(guān)鍵研究時才使用海洋人工培養(yǎng)基。例如，出于研究微量元素的目的，使用精心定義的人造海水介質(zhì)來最小化或排除已知污染物。

類似地，水質(zhì)、玻璃/塑料器皿清潔度等以與化學(xué)質(zhì)量相同的方式影響培養(yǎng)基，即不良或有毒物質(zhì)的存在以及所需物質(zhì)的缺乏會影響藻類生長。培養(yǎng)基和培養(yǎng)容器可以通過蒸汽高壓滅菌、巴氏滅菌、過濾或微波進行滅菌。

培養(yǎng)容器和材料

用于培養(yǎng)培養(yǎng)物和儲存培養(yǎng)基的所有容器和管道均應(yīng)仔細選擇，以避免有毒化合物。我們推薦使用硼硅酸鹽玻璃或組織培養(yǎng)級聚碳酸酯和聚苯乙烯塑料器皿制成的燒瓶和試管。黑色試管螺帽應(yīng)在海水變化時高壓滅菌幾次，因為新瓶蓋在加熱時可能會釋放出有毒的酚類物質(zhì)。

同樣，橡膠塞（或任何其他在加熱時釋放有氣味的揮發(fā)性化合物的東西）應(yīng)與介質(zhì)分開進行高壓滅菌。應(yīng)避免使用帶有銅管的老式高壓滅菌器，因為過量的銅對藻類有毒。高壓滅菌器蒸汽本身可能被金屬污染，并且培養(yǎng)基可能對開放海洋物種產(chǎn)生金屬毒性。

新的玻璃器皿應(yīng)在稀 NaOH 中脫脂。玻璃器皿可以定期用稀鹽酸清洗，或者，如果擔心金屬污染，建議在濃鹽酸中長時間浸泡。玻璃器皿不應(yīng)該用鉻酸清洗，因為鉻對許多浮游植物有毒。燒瓶可以用用粗棉布、硅膠海綿包裹的棉塞或用燒杯蓋住的塞子蓋住。由箔或塑料燒杯制成的蓋可以防止真菌在潮濕的塞子中生長。

大多數(shù)科學(xué)家在準備培養(yǎng)物時會豐富天然海水。海水來源可能會影響成功。一些沿海水域的鹽度降低，某些菌株可能無法忍受。NCMA 使用來自緬因灣的原始水，其鹽度約為 32 psu。在水華期間不應(yīng)收集海水，特別是當存在有毒生物時?？梢允褂眠^濾器（例如 0.45 µm 玻璃纖維過濾器）去除天然浮游植物?？梢酝ㄟ^添加來去除溶解的有機污染物每升加入一到幾克活性炭粉末并充分混合。第二天通過傾析和過濾除去碳。

為了簡化常規(guī)培養(yǎng)基制備，通常制備工作儲備溶液。添加少量液體儲備溶液比稱量單個干化學(xué)品更容易、更快捷。最好將原液添加到水中并混合 - 直接混合原液而不用水稀釋可能會導(dǎo)致不良沉淀。營養(yǎng)強化劑要么在滅菌前添加，要么在滅菌后無菌添加。滅菌是通過在 121°C、15 lb/in2 下高壓滅菌 15 分鐘或更長時間來完成，具體取決于所涉及的體積。高壓滅菌后應(yīng)盡快冷卻培養(yǎng)基以避免沉淀。二氧化硅可以增強沉淀，因此如果藻類不需要硅，最好將硅酸鹽排除在培養(yǎng)基之外。

營養(yǎng)物質(zhì)可能會被細菌或真菌污染。因此，謹慎的做法是首先對原液進行高壓滅菌，然后采用良好的無菌技術(shù)。應(yīng)仔細密封儲備溶液，因為蒸發(fā)會濃縮營養(yǎng)儲備。維生素庫存可以冷凍很長時間而不會明顯降解。在玻璃容器中高壓滅菌 Na2SiO3 儲備溶液可能會導(dǎo)致二氧化硅蝕刻或碎片狀沉淀。因此，我們建議在聚四氟乙烯涂層瓶中制備硅酸鹽儲備溶液。

高壓滅菌后，培養(yǎng)基應(yīng)放置約 24 小時，同時氣體（尤其是 CO2）擴散到液體中。通過快速冷卻可以最大限度地減少沉淀。對于大多數(shù)海水介質(zhì)來說，最終 pH 值為 7.8-8.2 是理想的。