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熒光定量PCR儀的工作原理是一種結(jié)合了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和熒光檢測技術(shù)的先進(jìn)分子生物學(xué)工具。它的核心在于利用熒光信號(hào)來實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR過程中DNA或RNA樣本的擴(kuò)增情況，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)基因的精確定量分析。
在熒光定量PCR中，首先需要將待測樣本與特異性引物、DNA聚合酶以及熒光基團(tuán)或熒光標(biāo)記的探針混合，形成一個(gè)反應(yīng)體系。然后，通過設(shè)定特定的PCR程序，如退火溫度、延伸時(shí)間等，使得DNA片段在PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。
在PCR反應(yīng)過程中，每當(dāng)一個(gè)DNA片段被擴(kuò)增時(shí)，與之結(jié)合的熒光基團(tuán)或探針就會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)。熒光定量PCR儀通過高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)，實(shí)時(shí)收集并分析這些熒光信號(hào)，將其轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)，從而精確地反映出PCR產(chǎn)物的生成量。
與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，熒光定量PCR儀具有更高的靈敏度和特異性。它不僅可以檢測到極低濃度的DNA或RNA樣本，而且可以區(qū)分不同的基因序列，避免了非特異性擴(kuò)增的干擾。此外，通過軟件對熒光信號(hào)的定量分析，可以準(zhǔn)確地計(jì)算出樣本中目標(biāo)基因的拷貝數(shù)或表達(dá)量，為科研工作者提供了更加準(zhǔn)確、可靠的數(shù)據(jù)支持。
總之，熒光定量PCR儀的工作原理是基于PCR技術(shù)和熒光檢測技術(shù)的結(jié)合，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)的變化來實(shí)現(xiàn)對DNA或RNA樣本的定量分析。它具有高靈敏度、高特異性以及準(zhǔn)確可靠的定量分析能力，為分子生物學(xué)研究、病原體檢測、基因表達(dá)分析等領(lǐng)域提供了重要的技術(shù)支持。
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