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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題分析
| 1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過(guò)深 一抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間 孵育溫度過(guò)高——選擇4℃或室溫孵育 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色 石蠟切片脫蠟——延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間 蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間 組織富含內(nèi)源性生物素與過(guò)氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無(wú)染色 一抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間 組織中無(wú)目的抗原的表達(dá) 一抗種屬來(lái)源與二抗不匹配 注意事項(xiàng) 切片脫蠟和水化要充分，加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，同時(shí)防止干片。 一抗的沖洗原則：?jiǎn)为?dú)沖洗，防交叉反應(yīng)污染；溫柔沖洗，防止切片脫落；推薦浸洗方式。 有條件的話(huà)最好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。 |
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