微載體免疫技術(shù)

微載體免疫技術(shù)

為進一步提高血清學反應(yīng)的敏感性，加速對被檢標本結(jié)果的報告時間，可應(yīng)用免疫微載體作為診斷液進行檢測。這種診斷液系將已知抗體吸附在紅細胞、炭粉或乳膠等微載體上，制成所謂的固相抗體，它是一種仍保持抗體特性的固態(tài)診斷血清，用它進行間接凝集反應(yīng)時，不但可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合，同時也可使吸附抗體的微量載體聚集在一起，這樣可使肉眼難以觀察到的微量抗原抗體結(jié)合物，尤其是微量的可溶性抗原-抗體結(jié)合物，形成肉眼可見的反應(yīng)產(chǎn)物，因而明顯地提高了血清學反應(yīng)的敏感性，反應(yīng)中的微載體起著“放大器”作用。

(一) 間接紅細胞凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白掛在經(jīng)醛化鞣酸化處理的紅細胞上，制成所謂的致敏紅細胞診斷液，用以實施反向間接血凝試驗，即在反應(yīng)板孔內(nèi)，如診斷液與被檢的相應(yīng)抗原相遇時，紅細胞即被凝集，形成鋸齒狀凝塊沉于孔底，即為陽性反應(yīng)，否則紅細胞自然下沉，于孔底形成圓點狀沉淀物為陰性反應(yīng)。另外，亦可用已知抗原致敏紅細胞制成診斷液檢測相應(yīng)抗體，此即正向間接血凝試驗。

間接血凝試驗是一項準確而敏感的血清反應(yīng)，在敏感性方面表現(xiàn)得尤為突出，如可檢出每ml含100萬個鼠疫桿菌、野兔熱桿菌或類鼻疽桿菌，每ml含160萬個炭疽芽胞、2 500萬個布魯氏菌、5000萬個霍亂弧菌、0.04μg肉毒梭菌毒素等。不足的方面是由于紅細胞表面是一個復雜的有機結(jié)構(gòu)，上面往往有許多抗原，可以和血清中的其他成分起反應(yīng)，因而一定程度地影響試驗的特異性。

(二) 間接炭凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白在一定溫度和pH值下吸附在細炭粉表面上，制成所謂的致敏炭粉診斷液，當與相應(yīng)抗原在實施反應(yīng)的玻板上相遇時，炭粉則被凝集，此時傾斜玻璃板觀察時，則看到好似無數(shù)個黑色帶閃光的細砂粒在液滴中滾動，即為陽性反應(yīng)；如果液滴仍呈濃墨汁狀團集一起，則為陰性反應(yīng)。

炭凝集反應(yīng)的最大特點是，對標本的純度要求不甚嚴格，受雜質(zhì)的干擾較小。不足的方面是敏感性稍差，只能檢出每毫升含2500萬個鼠疫桿菌、類鼻疽桿菌或馬流產(chǎn)沙門氏菌，和1億個布魯氏菌和霍亂弧菌的標本等。

(三) 間接乳膠凝集試驗 是利用直徑為0.6～0.7μm的聚苯乙烯乳膠(polystyrene)作載體，吸附抗體，制成致敏乳膠診斷液，檢測含相應(yīng)抗原標本的一種間接凝集反應(yīng)。它的原理和操作方法與上述的間接凝集試驗類似，只是采用人工合成的乳膠微球作載體，而不是天然的紅細胞或炭粉。在玻璃板上實施反應(yīng)，當致敏乳膠與相應(yīng)抗原相遇，如乳膠顆粒被凝集，則好似粉筆末飄浮在水中，為陽性反應(yīng)；液滴仍呈乳狀均等混濁，則為陰性反應(yīng)。

乳膠凝集反應(yīng)的優(yōu)點在于快速，數(shù)分鐘即可初報結(jié)果；操作簡便，無需特殊的儀器設(shè)備，在基層單位即可進行。所以近幾年來，國內(nèi)外已逐漸用其對沙門氏菌、炭疽桿菌、流行性感冒桿菌、嗜肺軍團桿菌、腦膜炎雙球菌、肺炎球菌、葡萄球菌腸毒素(2×10^-4μg/ml)和嗜鹽桿菌等作鑒定，以及對鉤端螺旋體患者血清抗體作檢測。不足的方面是，聚苯乙烯乳膠的性質(zhì)較脆弱，易受反應(yīng)環(huán)境中存在的雜質(zhì)的干擾，發(fā)生非特異性自家凝集，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。