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哺乳動物細胞表達系統(tǒng)具有促使蛋白正確折疊和實現(xiàn)復雜修飾的功能，表達的蛋白更近天然狀態(tài)，能夠運用于制藥等活性要求高的領域。利用哺乳動物細胞表達系統(tǒng)生產(chǎn)蛋白通常有兩種方式：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。那么瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別是什么呢？讓我們一起來看看吧！
一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實驗原理的異同
瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染都是將目的基因轉(zhuǎn)染至特定哺乳動物細胞內(nèi)，進而表達得到目的蛋白。不同的是瞬時轉(zhuǎn)染的方式外源基因并沒有轉(zhuǎn)染到細胞的染色體上而是存在于游離的載體上，這樣可以在短時間內(nèi)獲得基因的表達產(chǎn)物，但是隨著細胞的不斷分裂增殖外源基因最終會丟失，無法繼續(xù)進行重組蛋白的生產(chǎn)；而利用細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染則會將外源基因轉(zhuǎn)染至細胞染色體上，目的基因不會隨著細胞傳代而消失，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
二、實驗操作的差別
1. 瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所用的質(zhì)粒是不同的，瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性，而用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選。另外，兩者所用的培養(yǎng)基及實驗試劑也有所區(qū)別。
2. 瞬時轉(zhuǎn)染的操作比構(gòu)建穩(wěn)定細胞系的操作簡單，構(gòu)建好質(zhì)粒后，經(jīng)過細胞復蘇、轉(zhuǎn)染、細胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白；而構(gòu)建穩(wěn)定細胞系需要先將構(gòu)建好的質(zhì)粒線性化，再導入培養(yǎng)好的哺乳動物細胞內(nèi)，通過一定的轉(zhuǎn)染方式實現(xiàn)質(zhì)粒與細胞的融合，接著經(jīng)過細胞池篩選、單克隆篩選、細胞傳代培養(yǎng)等步驟才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系。對穩(wěn)定細胞系進行培養(yǎng)能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
三、應用場景
瞬時轉(zhuǎn)染表達和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達顯著的區(qū)別就是在時間上。瞬時轉(zhuǎn)染在轉(zhuǎn)染后四天即能收獲細胞，瞬時轉(zhuǎn)染一般用于基因產(chǎn)物的短期表達、蛋白質(zhì)的小規(guī)模合成。相對于瞬時轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達適用于長期的藥理學研究遺傳調(diào)控機制研究及大規(guī)模的蛋白質(zhì)合成，需要大量的周期，因此更費力成本投入高。
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