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【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程

來源：貝克曼庫爾特國際貿(mào)易（上海）有限公司   2024年05月30日 12:08  


01

技術(shù)背景


隨著現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，病毒載體作為一種強(qiáng)大的工具，在基因治療和基因編輯等領(lǐng)域發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。然而，病毒載體的純化過程往往耗時且復(fù)雜，這在一定程度上限制了相關(guān)研究的進(jìn)展。今天，我們就來探討一種全新的方法——利用VTi 90垂直轉(zhuǎn)子與CsCl（氯化銫）密度梯度離心技術(shù)，來加速病毒載體的純化過程，提高實(shí)驗(yàn)效率。



02

方法介紹


研究團(tuán)隊(duì)通過使用VTi 90垂直轉(zhuǎn)子和Optima XPN超速離心機(jī)，結(jié)合CsCl密度梯度離心技術(shù)，對病毒載體純化過程進(jìn)行了優(yōu)化。通過多段離心，調(diào)整離心速度和離心時間，實(shí)現(xiàn)了在更短時間內(nèi)達(dá)到密度梯度平衡的目標(biāo)。






03

實(shí)驗(yàn)過程


在實(shí)驗(yàn)中，研究團(tuán)隊(duì)首先將病毒載體樣品與CsCl溶液混合，然后將其加入Quick-Seal熱封管中。再使用VTi 90轉(zhuǎn)子進(jìn)行離心，通過調(diào)整離心速度和離心時間，使樣品在離心管內(nèi)形成穩(wěn)定的密度梯度。離心結(jié)束后，通過分餾的方式收集不同密度的樣品組分，并使用折射儀測量各組分并繪制密度梯度曲線。通過比較不同實(shí)驗(yàn)步驟的密度梯度曲線，找到與舊步驟密度梯度曲線相同的實(shí)驗(yàn)條件，確保了樣品條帶位于相同位置。


【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程

離心結(jié)果示意圖：


【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程





04

實(shí)驗(yàn)結(jié)果


基于 Optima XPN超速離心機(jī)對于分段離心步驟設(shè)置的支持（在一次運(yùn)行中運(yùn)行多個轉(zhuǎn)速步驟），研究團(tuán)隊(duì)最終找到了一種能夠在80分鐘（50+30分鐘）內(nèi)達(dá)到密度梯度平衡的優(yōu)化方案，較之前16小時的舊步驟提升了近12倍效率。


【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程



  1. 以更高的速度開始分離可以幫助更快地形成密度梯度。

  2. 將運(yùn)行速度降低足夠長的時間可以:

  • 與現(xiàn)有的(較慢的)步驟獲得相同的效果，將目標(biāo)條帶保留在相同的位置。

  • 平坦化密度梯度曲線，可提供更高的條帶分辨率。





05

結(jié)語


加速密度梯度形成、優(yōu)化病毒載體純化效率是一項(xiàng)具有重要意義的研究工作，不僅為病毒載體純化領(lǐng)域帶來了新的突破，也為廣大科研工作者提供了更高效、更便捷的實(shí)驗(yàn)方法，從而降低了實(shí)驗(yàn)成本和時間成本，為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供了有力支持！

如果您對以上方案感興趣，不妨看看相關(guān)離心產(chǎn)品，以下組合搭配即助您輕松實(shí)現(xiàn)病毒載體純化流程：



【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程



Optima X系列智能型超速離心機(jī)



Optima XPN系列配備益于初學(xué)者操作的 eXpert 智能軟件程序，同時為密度梯度離心等方法提供強(qiáng)大支持。產(chǎn)品還具有增強(qiáng)型數(shù)據(jù)管理功能，支持客戶 GMP 流程。

主要型號：Optima XPN-100 / 90 / 80

基礎(chǔ)型號：Optima XE-100 / 90

最大轉(zhuǎn)速（rpm）：100,000 / 90,000 / 80,000

最大相對離心力（xg）：802,000 / 694,000 / 548,300



【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程



Vti 90垂直轉(zhuǎn)子



Vti 90垂直轉(zhuǎn)子，最大相對離心力可達(dá)到645,000xg，最大轉(zhuǎn)速下K因子低至6。分離沉降系數(shù)約為60s的空殼AAV顆粒，僅需80min，為分離病毒顆粒的理想選擇。

  • 最大RPM：90 ,000

  • 最大RCF：645,000 xg

  • K因子：6

  • 離心管數(shù)量/體積/大小/尺寸：

? 8 x 5.1mL

? ? x 2 in

? 13 x 51 mm

  • 轉(zhuǎn)頭容量：40.8mL



【超離應(yīng)用】快速密度梯度形成技術(shù)，優(yōu)化病毒載體純化流程


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