PCR凝膠電泳問題，全都總結(jié)出來了！

1.Marker相關(guān)問題

1.1Marker 不直，偏斜或拖尾

原因：

1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換；

3.電壓太高，凝膠受熱導致不均勻；

4.電泳槽的電極歪斜；

1.2Maker 跑不開

原因：

1.膠濃度太大；

2.電泳時間太短；

2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問題

2.1沒條帶

原因：

沒跑出來

2.2條帶微弱

原因：

1.DNA降解

2.上樣量過少

3.沒跑出來，產(chǎn)物濃度過低，需再次PCR

2.3非特異性擴增

原因：

1.引物設計不合理。需重新設計引物，balst檢測引物特異性；

2.試劑被污染。包括水，酶，引物等。重新更換；

3.退火溫度太高。提高退火溫度，增加退火時間，減少循環(huán)數(shù)；

4.酶加入過多；

2.4 PCR產(chǎn)物彌散，拖尾或偏斜，Maker正常

原因：

1. 引物保存不當，降解。重新配制引物工作液。

2.模板降解或過量。重新檢查模板質(zhì)量，減少模板用量。

3.非特異性擴增。提高退火溫度，增加退火時間，減少循環(huán)數(shù)。

4.酶量過多或酶的質(zhì)量差。

5. 有蛋白和鹽的污染。

2.5 PCR產(chǎn)物和Maker 都彌散或拖尾

原因：

1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換。

3.電壓太高，凝膠受熱導致不均勻。

2.6 PCR產(chǎn)物與目的大小不符合

原因：

1.引物特異性不好。需重新設計引物，balst檢測引物特異性。

2.存在新的異構(gòu)體。

3.是目的基因，但大小有差異（我遇到過）。膠回收過后再次電泳條帶變?yōu)檎４笮　Ｓ龅竭@個情況可以測序看看結(jié)果。

2.7 電泳孔亮

原因：有蛋白或者多糖的污染，這些大分子物質(zhì)影響了DNA或RNA的出孔，使其停留在孔中或者出孔很慢。導致孔以及接近孔的位置很亮。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務。