為什么我的IC50值和報(bào)道的不同？

IC50是一種測(cè)量化合物抑制生物學(xué)活性的常用方法，藥物研發(fā)中的應(yīng)用尤其廣泛。IC50代表半最大抑制濃度，即一種化合物抑制特定生物學(xué)反應(yīng)的能力，使其活性降低50%的濃度。這種生物學(xué)活性可以是酶的活性、受體的信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞增殖或其他生物學(xué)效應(yīng)。

IC50的測(cè)定通常通過(guò)在不同濃度的化合物溶液中進(jìn)行生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)完成。通過(guò)測(cè)量生物學(xué)效應(yīng)的變化（例如酶活性或細(xì)胞生存率）并繪制濃度-響應(yīng)曲線(xiàn)，可以確定IC50值。通常，IC50值越低，即化合物對(duì)生物學(xué)目標(biāo)的抑制作用越強(qiáng)。

IC50在藥物研發(fā)中具有多種應(yīng)用。首先，它可以用來(lái)評(píng)估化合物對(duì)特定靶標(biāo)的親和力和選擇性。較低的IC50值通常表示化合物對(duì)靶標(biāo)具有較高的親和力。其次，IC50還可以用來(lái)評(píng)估化合物的藥理學(xué)效應(yīng)，如藥物對(duì)疾病相關(guān)酶的抑制作用。此外，IC50值還可以用來(lái)比較不同化合物之間的活性，以便進(jìn)行藥物篩選和優(yōu)化。

盡管IC50的應(yīng)用十分廣泛，但是我們?cè)谧约旱腎C50測(cè)試過(guò)程中經(jīng)常遇到測(cè)試結(jié)果與報(bào)道結(jié)果不一致的情況。實(shí)際上，IC50的差異是廣泛存在的。

如，Pexidartinib vs CSF1R檢測(cè)中，最常被報(bào)道的IC50值是20nM，但是其他的測(cè)試結(jié)果也同樣被報(bào)道：

1.7 nM (doi.org/10.1016/j.bmcl.2022.128928)

2.7nM (doi.org/10.1016/j.cbi.2022.110255)

9.7nM (doi.org/10.1021/acs.jmedchem.3c00428)

文獻(xiàn)中的測(cè)試方法是不一樣的，以上的測(cè)試結(jié)果分別使用了分光光度法, Z-LYTE檢測(cè)和LANCE TR-FRET檢測(cè)。20nM的測(cè)試數(shù)值很可能是Plexxikon最先報(bào)道出來(lái)的，通過(guò)ChEMBL數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)，并沒(méi)有給出詳細(xì)的出處和測(cè)試方法。不同的測(cè)試方法所獲得的IC50的數(shù)值是不一樣的，甚至是數(shù)量級(jí)上的差別。

U0126 vs MKK1的IC50測(cè)試中，使用的截短的、構(gòu)成活性的重組MKK1結(jié)構(gòu)域，其IC50約為70 nM，使用細(xì)胞中分離的全長(zhǎng)內(nèi)源活化的野生型MKK1，其IC50約為500 nM。酶的結(jié)構(gòu)，甚至翻譯后修飾、氧化還原狀態(tài)或部分降解產(chǎn)物同樣會(huì)對(duì)IC50的測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生極大影響。

下圖分別顯示底物濃度[S]、酶濃度[E] 對(duì)standard competitive, uncompetitive和non-competitive抑制中IC50檢測(cè)的不同的影響。對(duì)更多的抑制類(lèi)型的影響請(qǐng)參考原文。

此外，緩沖成分、pH值和離子強(qiáng)度也同樣對(duì)IC50的檢測(cè)有著不可預(yù)知的影響。

由于IC50數(shù)值的影響因素眾多，自己實(shí)驗(yàn)室的IC50檢測(cè)值很難與報(bào)道或其他實(shí)驗(yàn)室的IC50檢測(cè)值進(jìn)行直接比較。