避免同種系物種的一抗選擇
- 避免同種系干擾:在進行小鼠樣本檢測時,應避免使用小鼠或大鼠來源的一抗。
- 原因:防止二抗與樣本中的內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生交叉反應,導致背景信號過高。
稀有樣本種屬的抗體選擇策略
- 免疫原序列查詢:對于市面上難以找到驗證過的抗體,如豬、牛等,可以通過查詢抗體的免疫原序列,并與待測蛋白進行同源性分析。
- 同源性標準:若同源性超過90%,可以嘗試使用,但需注意,這種情況下,廠家通常不提供質(zhì)保。
- 同源性分析方法:詳見下方視頻教程。
- 商業(yè)機密問題:對于某些品牌,如CST,免疫原序列可能屬于商業(yè)機密。此時,可以提供自己的蛋白序列,請求廠家專家?guī)椭治鐾葱圆⒔o出使用建議。
實驗方法確認
確認抗體適用性
- 實驗方法標注:檢查抗體說明書上的實驗方法(application),確保包含您計劃進行的實驗類型。
- WB實驗簡便性:如果僅進行Western Blot(WB),選擇在說明書中標注WB的抗體即可。
- 多實驗方法選擇:建議選擇實驗方法多樣的抗體,以便未來進行其他類型實驗時無需重復購買。
- 免疫組化(IHC)注意事項:若進行IHC,需確認樣本類型(如石蠟切片、冰凍切片或細胞)是否已由廠家驗證。未經(jīng)驗證的樣本類型通常不提供質(zhì)保。
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