關(guān)鍵詞：菌種 菌種保藏 保藏時(shí)間 原理 斜面保藏 液體石蠟保藏 砂土管保藏 超低溫保藏 冷凍干燥保藏 穿刺保藏

菌種保藏的目的是為了保持菌種的活性、不污染雜菌，同時(shí)防止其優(yōu)良性狀丟失，以便于隨時(shí)為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種。菌種保藏的方法多種多樣，但基本原理大多相同，主要是通過創(chuàng)造降低微生物代謝活動(dòng)強(qiáng)度、生長(zhǎng)繁殖受抑制、難以發(fā)生突變的環(huán)境條件來實(shí)現(xiàn)。以下是幾種常見的菌種保藏方法：

1. 斜面保藏法

方法：在無菌條件下將需要保藏的菌種接種在合適的固體斜面培養(yǎng)基上，接種完畢的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室中培養(yǎng)，待菌種生長(zhǎng)成熟后，將培養(yǎng)基密封放至2-8℃的冰箱中保藏。保藏時(shí)間依微生物的種類而定，一般霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌可保存2-4個(gè)月，酵母菌可保存2個(gè)月，細(xì)菌可保存一個(gè)月。

優(yōu)點(diǎn)：培養(yǎng)基定期配制可保證保藏的菌種新鮮有活力，且操作過程簡(jiǎn)單，培養(yǎng)基可隨時(shí)用于生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)，人員能隨時(shí)檢查菌種的保藏情況。

缺點(diǎn)：保藏時(shí)間較短需定期接種；傳代次數(shù)過多可能會(huì)使菌種發(fā)生變異，從而影響菌種的性狀；接種和保藏過程中容易污染雜菌。

圖示為斜面保藏法

2. 液體石蠟保藏法

方法：在無菌條件下，將已滅菌且水分已充分蒸發(fā)的石蠟倒入斜面培養(yǎng)基或穿刺培養(yǎng)物上，石蠟需高于培養(yǎng)基頂端1cm，以達(dá)到隔絕空氣保藏菌種的目的。

優(yōu)點(diǎn)：液體石蠟保藏法能適當(dāng)延長(zhǎng)菌種的保藏時(shí)間，可防止菌種因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而死亡，且不需要經(jīng)常接種，保藏時(shí)間可達(dá)1-2年。

缺點(diǎn)：斜面必須直立保存，占用空間較大，不便攜帶。且石蠟制作方式復(fù)雜，接種時(shí)需充分冷卻，防止石蠟飛濺引發(fā)安全事故。

圖示為液體石蠟保藏法

3. 砂土管保藏法

方法：將河砂與非耕作層不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土分分別洗凈、烘干、過篩（一般河砂60目過篩，土100目過篩）后按2:1的比例裝入10mmx100mm的小試管中，每支裝量1g左右，塞上棉塞充分滅菌后即可用于菌種保藏。

優(yōu)點(diǎn)：保藏時(shí)間較長(zhǎng)，保藏效果好，使用起來操作方便。

缺點(diǎn)：操作步驟相對(duì)復(fù)雜，菌種可能因砂土處理不合格而無法保持活性。

圖示為砂土保藏法

4. 超低溫保藏法

方法：將甘油與純化水配制成甘油濃度為10%-30%的保護(hù)劑，經(jīng)高溫滅菌后，在無菌條件下分裝到5ml或2ml的冷凍管中，并將培養(yǎng)成熟且檢測(cè)合格的菌種孢子用接種針刮下放入冷凍管中，于超低溫冰箱（-50-80℃）或液氮（-196℃）中保藏。

優(yōu)點(diǎn)：微生物在超低溫環(huán)境下代謝基本停止，因此保存時(shí)間長(zhǎng)，菌種不容易發(fā)生變異。

缺點(diǎn)：需要特殊設(shè)備，如超低溫冰箱、液氮冷凍保藏器等，且操作相對(duì)復(fù)雜，液氮冷凍保藏對(duì)液氮的消耗量也較大。

圖示為超低溫保藏法

5. 冷凍干燥保藏法

方法：將培養(yǎng)成熟且檢測(cè)合格的菌種在無菌條件下與保護(hù)劑制成細(xì)胞菌懸液，分裝到安瓿瓶中，于超低溫冰箱中快速冷凍，達(dá)到規(guī)定溫度后對(duì)菌懸液進(jìn)行減壓抽真空干燥處理，然后在真空狀態(tài)下對(duì)安瓿瓶融封，將安瓿瓶置于低溫條件下保藏菌種。

優(yōu)點(diǎn)：保存時(shí)間可達(dá)數(shù)年，便于攜帶，菌種不容易發(fā)生變異。

缺點(diǎn)：需要使用特殊設(shè)備和操作技術(shù)，成本較高。

圖示為冷凍干燥保藏法

6. 穿刺保藏法

方法：準(zhǔn)備好于試管中盛放的半固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基約為試管的1/3。無菌條件下用接種針挑選培養(yǎng)成熟且外觀合格的單菌落，將接種針垂直刺入培養(yǎng)基中至接近底部，重復(fù)數(shù)次，接種完畢后密封試管，于適宜條件下培養(yǎng)合格后放至2-8℃冰箱中保存。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，使用方便，保存時(shí)間較斜面保藏法相對(duì)較長(zhǎng)。

缺點(diǎn)：培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不宜太過豐富，防止因菌種代謝而影響保存。

圖示為穿刺保藏法

綜上所述，菌種保藏方法多種多樣，每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)。在選擇保藏方法時(shí)，應(yīng)根據(jù)微生物的種類、實(shí)驗(yàn)室條件以及保藏時(shí)間的長(zhǎng)短等因素綜合考慮。