無菌液體培養(yǎng)基制備：高效滅菌技術

關鍵詞：液體培養(yǎng)基 微生物 芽孢 細菌 高壓蒸汽滅菌 溫度 壓力 過濾除菌 濾菌器 濾膜 無菌操作 紫外線滅菌 化學滅菌

液體培養(yǎng)基是微生物學、細胞生物學等領域中常用的一種培養(yǎng)基形式，與固體培養(yǎng)基相對應，它主要呈液態(tài)，可以通過通氣或振蕩的方式培養(yǎng)微生物或動植物細胞。液體培養(yǎng)基在配制過程中容易受到細菌、真菌、芽孢等微生物的污染，從而影響實驗細胞的生長繁殖。因此需采取有效方式對液體培養(yǎng)基充分滅菌，以保證實驗細胞的正常生長。

一、高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌是實驗室中常用的滅菌方法之一，適用于耐高溫的物體、器皿及培養(yǎng)基的滅菌。其原理是利用高溫高壓的蒸汽來破壞微生物的細胞結構，從而達到滅菌的目的。

操作步驟如下：

1.準備：將配制好的液體培養(yǎng)基分裝至合適的容器如三角瓶或試管中，分裝好的培養(yǎng)基用棉塞、紗布或無菌透氣封口膜等包扎密封，放入消毒筐中等待滅菌。注意培養(yǎng)基不要裝得太滿，一般裝量不超過容器的2/3即可，以防在滅菌過程中因容器內外壓力不平衡而導致培養(yǎng)基溢出；容器與容器之間應留有空隙，不宜太過擁擠，保證蒸汽可以在容器之間流通。

2.裝鍋：將消毒筐放入壓力蒸汽滅菌鍋內，關緊鍋門，防止因鍋內蒸汽溫度壓力過高而發(fā)生安全事故。打開蒸汽進汽閥門，開始滅菌。

3.加熱升溫：調節(jié)滅菌鍋的排汽閥，使鍋內壓力及溫度逐漸升高至規(guī)定的滅菌要求。在蒸汽壓力為0.105MPa（約1.05大氣壓）時，鍋內溫度可達到121℃。

4.滅菌：在達到滅菌規(guī)定的溫度和壓力后，保持一段時間，通常為121-124℃，滅菌30min左右，以確保細菌、真菌、芽孢等微生物被殺滅。記錄滅菌的溫度及時間，做到可追溯。

5. 降壓取物：滅菌結束后，關閉蒸汽進汽閥門，調節(jié)排汽閥或通過自然降壓的方式使鍋內壓力降至零，打開滅菌鍋門取出培養(yǎng)基。注意從鍋內取出物品時應戴好手套，防止燙傷。

圖示為高壓蒸汽滅菌

二、過濾除菌

對于一些不耐熱的液體培養(yǎng)基，如某些植物生長調節(jié)劑或有機物，溫度過高容易分解，可以采用過濾除菌的方法對培養(yǎng)基進行處理。

操作步驟如下：

1.準備：選擇合適的濾菌器，通常使用孔徑為0.45μm的薄膜濾菌器，使用前需對濾膜及收集濾液的容器進行高溫滅菌處理，防止濾膜及容器上的微生物污染培養(yǎng)基。濾膜應定期檢查更換，防止過濾效果降低。

2.過濾：將需要除菌的液體培養(yǎng)基在無菌條件下通過濾菌器進行過濾，以去除培養(yǎng)基中的微生物及芽孢。

3.收集：將過濾后的無菌培養(yǎng)基收集到無菌容器中，并密封保存?zhèn)溆谩?br style="-webkit-tap-highlight-color: transparent; margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;"/>

圖示為過濾除菌用濾膜

三、其他滅菌方法

除了上述兩種常用的滅菌方法外，還有一些其他方法也可以用于液體培養(yǎng)基的滅菌，如紫外線滅菌、化學滅菌等。但這些方法通常具有局限性，如紫外線滅菌穿透力弱，只適用于空氣及物體表面滅菌；化學滅菌可能殘留有害物質，影響實驗細胞的正常生長等，因此在實際應用中紫外線滅菌及化學滅菌較少采用。

四、注意事項

1.滅菌時間：高壓蒸汽滅菌時間不宜過長或過短，過長可能導致培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分被破壞，過短則可能無法殺滅微生物及芽孢。

2.溫度控制：在滅菌過程中應嚴格控制溫度，確保達到所需的滅菌溫度并保持足夠的時間。

3.無菌操作：過濾除菌的整個過程要保持無菌操作，避免任何可能的污染。

4.保存條件：滅菌后的培養(yǎng)基應盡快使用，如需保存應置于適當的溫度下（如10℃以下），并定期檢查是否有污染現象發(fā)生。